[發明專利]一種用于培養人脂肪干細胞的培養基

在審

• 申請號: 201810597029.0
• 申請日: 2016-03-06
• 公開（公告）號: CN108441467A
• 公開（公告）日: 2018-08-24
• 發明（設計）人: 李倩
• 申請（專利權）人: 李倩
• 主分類號: C12N5/0775
• 分類號: C12N5/0775;C07K7/08;C12P21/06;C07K1/14;C07K1/16
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明公開了一種用于培養人脂肪干細胞的培養基，該培養基由如下組分組成：DMEM基礎培養基、人血清白蛋白、轉鐵蛋白、還原型谷胱甘肽、亞油酸、青霉素，鏈霉素，L?谷氨酰胺，堿性成纖維細胞生長因子，維生素C和植物提取多肽組成。本發明的培養基具有培養速度，細胞保持較好的完整性和活性。該培養基能夠用于大規模的細胞培養，成本低廉方便配制。

技術領域

本發明涉及生物技術領域，特別涉及一種人脂肪干細胞的培養基。

背景技術

脂肪干細胞(Adipose-derived stem cells，ADSCs)是近年來從脂肪組織中分離得到的一種具有多向分化潛能的干細胞，具有可迅速擴增、不易衰老等一般干細胞的特點。人脂肪干細胞即人體脂肪間充質干細胞是目前廣泛應用于組織工程及再生醫學領域的一種成體干細胞與骨髓間充質干細胞一樣具有多向分化潛能。ADSCs呈成纖維細胞樣生長，胞漿和核仁豐富，呈平行或漩渦樣排列。細胞周期分析顯示G0/G1期的細胞占69％，S期占24％，G2/M期占8％。在胎牛血清的存在條件下傳代培養2-3天細胞增殖1倍。多次傳代(10-20代)后，細胞增殖速度無明顯減慢，在傳代6次后細胞群體中出現衰老細胞，第15代細胞群體中衰老細胞約占15％。

由于人脂肪間充質干細胞分離培養周期較長，原代細胞鋪滿的時間約2周以上，達到一定的數量需要3周左右。人脂肪間充質干細胞體外長期培養傳代容易發生自發分化，失去其多向分化的潛能。所以為保證實驗的連續性，必須隨時提供大量的實驗或組織工程用的種子細胞。因此，對于細胞培養基的需求非常強烈。

目前常用的ADSCs培養是利用飼養層細胞與采用含10％胎牛血清的培養基進行培養。這種培養干細胞方法的缺點是方法復雜，提取的干細胞數量少，純度不高，繼代增殖緩慢，更要緊的是使用飼養層細胞和動物血清容易導致干細胞污染，特別是動物血清內潛在動物源性內毒素或病毒將對人體健康構成極大地風險，這樣培養出的干細胞不適于直接應用于臨床。因此，開發一種合適的有效的培養基變得迫在眉睫。

發明內容

本發明的目的是提供一種人脂肪干細胞培養基，克服使用血清制備細胞培養基的缺點和風險。大規模生產中，血清來源越來越困難，價格昂貴,是構成動物細胞培養生產成本的主要部分之一。

本發明提供一種特別適合于人脂肪干細胞培養基，該培養基由如下組分組成：DMEM基礎培養基、人血清白蛋白、轉鐵蛋白、還原型谷胱甘肽、亞油酸、青霉素，鏈霉素，L-谷氨酰胺，堿性成纖維細胞生長因子，維生素C和植物提取多肽組成。

其中，各組分的具體用量分別為青霉素100IU/ml，鏈霉素100μg/ml，L-谷氨酰胺2mmol/L，堿性成纖維細胞生長因子l0ng/ml，維生素C 50μg/ml，人血清白蛋白13μg/mL，轉鐵蛋白6μg/mL、還原型谷胱甘肽濃度為10μg/mL、亞油酸濃度為5μg/mL，植物提取多肽30μg/ml。

本發明另外提供一種培養人脂肪干細胞的方法，包括將人脂肪干細胞加入到所述的人脂肪干細胞培養基進行培養的步驟。

本發明另外提供一種獲得植物多肽，該多肽從天然植物川西喜冬草中提取，川西喜冬草常綠小草本狀半灌木，其葉片稍肥厚有光澤，申請人推測其就有較強的耐逆和抗旱抗氧化的功效。申請人通過分離該植物葉片通過制備蛋白庫功能分析發現，該植物提取的多肽具有穩定人脂肪干細胞，促進干細胞生長，保持干細胞正常生長狀態的功效。