[發(fā)明專利]超嗜熱脂肪酶LipK及其相關(guān)生物材料與應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810596755.0
• 申請(qǐng)日: 2018-06-11
• 公開（公告）號(hào): CN108753759B
• 公開（公告）日: 2021-09-14
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 顧金剛;王宇洲;馬銳;李世貴;龔明波;向杰;陳敬師
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)業(yè)資源與農(nóng)業(yè)區(qū)劃研究所
• 主分類號(hào): C12N9/20
• 分類號(hào): C12N9/20;C12N15/55;C12N15/82;C12N15/70
• 代理公司: 北京紀(jì)凱知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11245
• 代理人: 關(guān)暢;任鳳華

本發(fā)明公開了超嗜熱脂肪酶LipK及其相關(guān)生物材料與應(yīng)用。該超嗜熱脂肪酶LipK為A1)?A3)中的任一蛋白質(zhì)：A1)氨基酸序列是SEQ ID No.2的蛋白質(zhì)；A2)氨基酸序列是SEQ ID No.2的第53?587位的蛋白質(zhì)；A3)氨基酸序列是SEQ ID No.2的第54?587位的蛋白質(zhì)。該超嗜熱脂肪酶的酶反應(yīng)的最適溫度為80℃，酶反應(yīng)的最適pH為9.5，在37℃、pH值為9?10條件下的脂肪酶酶活是在37℃、pH值為9.5條件下的脂肪酶酶活的92％以上，在80?90℃、pH值為9.5條件下的脂肪酶酶活是在80℃、pH值為9.5條件下的脂肪酶酶活的90％以上。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域中超嗜熱脂肪酶LipK及其相關(guān)生物材料與應(yīng)用。

背景技術(shù)

脂肪酶(EC 3.1.1.3)被認(rèn)為是最重要的商業(yè)酶之一，在快速增長的生物技術(shù)領(lǐng)域引起了極大的關(guān)注。脂肪酶可以在油和水的界面催化三酰基甘油水解，釋放二酰基甘油酯，長鏈脂肪酸(10個(gè)碳)和甘油。在水解過程中，脂肪酶與底物酰基結(jié)合形成脂肪酶-酰基復(fù)合物，然后將酰基轉(zhuǎn)移到水分子的羥基基團(tuán)上從而實(shí)現(xiàn)水解。在非水溶條件下，脂肪酶可以將羧酸的酰基轉(zhuǎn)移到親核試劑。

微生物來源的脂肪酶廣泛用于各領(lǐng)域，包括工業(yè)、食品、飼料和醫(yī)療領(lǐng)域。與傳統(tǒng)化學(xué)催化劑相比，脂肪酶使用領(lǐng)域更為廣泛且可重復(fù)使用，對(duì)環(huán)境友好等優(yōu)點(diǎn)而被重視，但脂肪酶大都對(duì)極端溫度以及苛刻反應(yīng)pH比較敏感，必須根據(jù)特定的工業(yè)環(huán)境選擇具有特定酶學(xué)性質(zhì)的脂肪酶。根據(jù)最適反應(yīng)溫度可以將脂肪酶分為低溫、中溫、嗜熱和超嗜熱酶，目前大多數(shù)工業(yè)生產(chǎn)都是在中高溫堿性條件下進(jìn)行的(45℃以上，pH7以上)。通常在實(shí)際應(yīng)用中使用的化學(xué)類催化劑不具備生物學(xué)活性，這是酶制劑在工業(yè)反應(yīng)中的一大優(yōu)勢(shì)，而在苛刻的工業(yè)條件下穩(wěn)定存在并且持續(xù)發(fā)揮著催化活性的脂肪酶就顯得鳳毛麟角了，尤其是超過80℃的最適溫度的超嗜熱脂肪酶幾乎難以找到。許多脂肪酶參與的工業(yè)催化反應(yīng)過程都要求較高的反應(yīng)溫度和較好的熱穩(wěn)定性，如紙架脫脂脫墨、皮毛脫脂以及飼料生產(chǎn)，因此超嗜熱脂肪酶在工業(yè)領(lǐng)域具有著重要的意義。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明所要解決的一個(gè)技術(shù)問題是提供超嗜熱脂肪酶。

本發(fā)明所提供的超嗜熱脂肪酶是A1)-A5)中的任一蛋白質(zhì)：

A1)氨基酸序列是SEQ ID No.2的蛋白質(zhì)；

A2)氨基酸序列是SEQ ID No.2的第53-587位的蛋白質(zhì)；

A3)氨基酸序列是SEQ ID No.2的第54-587位的蛋白質(zhì)；

A4)在A2)或A3)所示的蛋白質(zhì)的羧基端或/和氨基端融合蛋白標(biāo)簽得到的融合蛋白；

A5)將A2)或A3)所示的蛋白質(zhì)經(jīng)過一個(gè)或幾個(gè)氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加得到的具有超嗜熱脂肪酶活性的蛋白質(zhì)。

上述超嗜熱脂肪酶中，A1)的蛋白質(zhì)名稱為RTLipK-his，A2)的蛋白質(zhì)名稱為RTLipK，A3)的蛋白質(zhì)名稱為TLipK。TLipK是來源于Trichoderma lentiforme ACCC30425的成熟的蛋白質(zhì)。RTLipK是在TLipK的氨基末端添加甲硫氨酸殘基保持TLipK的其它氨基酸殘基不變得到的重組蛋白質(zhì)。RTLipK-his是在TLipK的氨基末端添加SEQ ID No.2的第1-53位氨基酸殘基，在TLipK的羧基末端添加SEQ ID No.2的第588-595位氨基酸殘基，保持TLipK的其它氨基酸殘基不變得到的重組蛋白質(zhì)。

上述超嗜熱脂肪酶中，SEQ ID No.2由595個(gè)氨基酸殘基組成。

上述超嗜熱脂肪酶中，蛋白標(biāo)簽是指利用DNA體外重組技術(shù)，與目的蛋白一起融合表達(dá)的一種多肽或者蛋白，以便于目的蛋白的表達(dá)、檢測(cè)、示蹤和/或純化等。