[發明專利]缺刻緣綠藻二酰甘油酰基轉移酶(MiDGAT2C)基因序列及功能鑒定

有效

• 申請號: 201810595704.6
• 申請日: 2018-06-11
• 公開（公告）號: CN108588099B
• 公開（公告）日: 2019-09-06
• 發明（設計）人: 周志剛;劉偉;陳春秀;房逢立
• 申請（專利權）人: 上海海洋大學
• 主分類號: C12N15/54
• 分類號: C12N15/54;C12N9/10;C12N15/63;C12P7/64
• 代理公司: 上海卓陽知識產權代理事務所(普通合伙) 31262
• 代理人: 周春洪

本發明涉及缺刻緣綠藻二酰甘油酰基轉移酶(MiDGAT2C)基因序列(如SEQ ID NO:7所示)及其應用。其特點表現在：MiDGAT2C不同于本課題組已克隆到的另外兩個DGAT2基因。將該基因轉化至酵母的TAG合成缺陷株H1246中表達，發現該基因的轉入確實能使該酵母缺陷株H1246恢復合成TAG，證明了該基因編碼蛋白具有合成TAG的功能。并發現MiDGAT2C對花生四烯酸?CoA沒有催化活性，但能將亞油酸?、γ?亞麻酸?或α?亞麻酸?CoA的酰基轉至DAG甘油骨架的sn?3位以產生TAG，且能力相近。

技術領域

本發明涉及基因工程技術領域，具體地說，涉及缺刻緣綠藻二酰甘油酰基轉移酶(MiDGAT2C)基因序列及功能鑒定。

背景技術

隨著石油、煤、天然氣等有限自然資源的不斷耗盡，人類對可再生能源的需求日益強烈。科學家們急需尋求一種占地資源少、產業性能強、對環境污染可控的新型可再生能源。生物柴油，特別是微藻生物柴油以其得天獨厚的優勢越來越被科學家們所青睞。生物柴油的主要原料為三酰甘油(TAG)，它以油滴的方式存在于真核生物的細胞中。本發明有關的微藻是缺刻緣綠藻(Myrmecia incisa Reisigl H4301)，它是一種淡水單細胞微藻，隸屬綠藻門(Chlorophyta)。該藻能大量積累TAG，特別在缺氮培養條件下，是潛在的微藻生物柴油藻種。

TAG的合成有三條途徑，其中Kennedy途徑是唯一一條依賴于酰基-輔酶A(CoA)的途徑，也是TAG合成的主要途徑，該途徑通過各種酰基轉移酶依次把酰基-CoA的酰基鏈轉移到甘油骨架的sn-1、sn-2和sn-3位置。酰基-CoA:二酰基甘油酰基轉移酶(DGAT，EC2.3.1.20)作用于TAG生物合成的最后一步。它以酰基-CoA為底物，催化并使sn-1，2-二酰基甘油(DAG)甘油骨架的sn-3位酰化，從而形成TAG。同時，它也是一種限速酶，它有可能被用來增加含油植物包含微藻的含油量。到目前為止，發現DGAT有三個家族，分別為DGAT1、DGAT2和DGAT3。

專利號為ZL201210477507.7的中國專利公開了一種缺刻緣綠藻二酰甘油酰基轉移酶(MiDGAT2A)，專利號為ZL201310668330.3的中國專利公開了一種缺刻緣綠藻二酰甘油酰基轉移酶(MiDGAT2B)，專利號為ZL201510646709.3的中國專利公開了一種缺刻緣綠藻二酰甘油酰基轉移酶1(MiDGAT1)。但是，本發明的缺刻緣綠藻二酰甘油酰基轉移酶(MiDGAT2C)還未見報道。

發明內容

本發明的第一個目的是，針對現有技術中的不足，提供一種DNA序列。

本發明的第二個目的是，提供一種DNA序列的應用。

本發明的第三個目的是，提供一種蛋白。

本發明的第四個目的是，提供一種蛋白的應用。

本發明的第五個目的是，提供一種重組表達載體。

本發明的第六個目的是，提供一種重組表達載體的應用。

本發明的第七個目的是，提供一種cDNA序列。

為實現上述第一個目的，本發明采取的技術方案是：一種分離的DNA序列，其特征在于，所述的DNA序列為：

a)如SEQ ID NO:7所示的核苷酸序列；或

b)與a)所述的核苷酸序列互補的核苷酸序列。

為實現上述第二個目的，本發明采取的技術方案是：所述的DNA序列在生產三酰甘油中的應用。

將亞油酸-、γ-亞麻酸-或α-亞麻酸-CoA的酰基轉至DAG甘油骨架的sn-3位以產生三酰甘油。

為實現上述第三個目的，本發明采取的技術方案是：上述DNA序列編碼的蛋白。