[發明專利]以玉米秸稈酸處理水解液生產微生物油脂的方法

在審

• 申請號: 201810594510.4
• 申請日: 2018-06-11
• 公開（公告）號: CN108795997A
• 公開（公告）日: 2018-11-13
• 發明（設計）人: 王澤迪;茍一雄;方木林;柏霖;金明杰;聞志強;許召賢;翟睿
• 申請（專利權）人: 南京理工大學
• 主分類號: C12P7/64
• 分類號: C12P7/64;C12R1/645
• 代理公司: 南京理工大學專利中心 32203
• 代理人: 劉海霞

1.以玉米秸稈酸處理水解液生產微生物油脂的方法，其特征在于，具體步驟如下：

步驟1，玉米秸稈粉末加入到質量濃度為1％～3.5％的稀硫酸溶液，在110～200℃下預處理15～30min，過濾得到玉米秸稈干物；

步驟2，在玉米秸稈干物中加入纖維素酶與木聚糖酶組成的復配酶溶液，水解得到玉米秸稈水解液；

步驟3，在玉米秸稈水解液中加入終濃度為6.8～10.2g/L的酵母粉，1.1～3.3g/L的(NH)₂SO₄，3～9g/L的KH₂PO₄和Mg₂SO₄·7H₂O，溶解后調節pH至5～7，滅菌，得到發酵培養基；

步驟4，在發酵培養基接種解脂耶氏酵母NRRL Y-1095，動態培養，發酵結束后，離心收集菌體，菌體經破碎后采用氯仿-甲醇法提取得到油脂。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟1中，所述的玉米秸稈粉末與稀硫酸溶液的質量比為1:9。

3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟2中，所述的纖維素酶與木聚糖酶的質量比為7:3。

4.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟2中，所述的玉米秸稈水解液制備的具體步驟如下：

將玉米秸稈干物烘干后，按復配酶按照20mg酶蛋白/g葡聚糖的酶加量，在50℃、250rpm條件下水解預處理后的秸稈干物24小時，并在6000r/min轉速下離心15min，得到玉米秸稈水解液。

5.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟3中，所述的調節pH至5.8。

6.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟3中，所述的調節pH所用的堿為NaOH。

7.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟4中，所述的解脂耶氏酵母NRRLY-1095的接種量為5～7％，發酵條件為30℃，180～250r/min，培養時間為96～120小時。

8.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟4中，所述的離心速度為8000～12000rpm，離心時間為5～10min。

9.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟4中，所述的氯仿-甲醇法提取油脂的具體步驟為：在濕菌體中加入4mol/L HCl，于78℃水浴處理1.5～2h，冷卻后，加入甲醇，充分振蕩，按甲醇：氯仿＝1：1(V/V)加入氯仿，振蕩，離心，收集氯仿層，在剩余混合液中再加入氯仿，充分振蕩，離心，收集氯仿層，合并氯仿提取液，將收集到的氯仿提取液烘干，冷卻得到油脂。