[發(fā)明專利]具微米多孔結(jié)構(gòu)的富血小板裂解液血漿基水凝膠

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201810592947.4
• 申請日: 2018-06-11
• 公開（公告）號: CN109111580B
• 公開（公告）日: 2021-08-03
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 鄧俊杰;袁珊珊;尋曉潔;蘇明;王辰飛
• 申請（專利權(quán)）人: 溫州生物材料與工程研究所
• 主分類號: C08J3/075
• 分類號: C08J3/075;C08L89/00;C08L5/04;C08L33/02;A61L27/36;A61L27/50;A61L27/52;A61L27/56
• 代理公司: 天津市北洋有限責任專利代理事務(wù)所 12201
• 代理人: 李素蘭

本發(fā)明公開了一種具微米多孔結(jié)構(gòu)的富血小板裂解液血漿基水凝膠，其制備方法為：1)配制富血小板裂解液血漿溶液；2)配制交聯(lián)劑溶液，加入EDC,反應(yīng)，再加入NHS，混勻；3)在離心管中依次加入：a.富血小板裂解液血漿溶液；b.羅丹明?牛血清蛋白水溶液；c.磷酸緩沖溶液；d.步驟2)獲得的液體；混勻后倒入模具中，低溫下反應(yīng)獲得。(1)本發(fā)明的凝膠富含多種細胞因子和生長因子，具有內(nèi)部微孔結(jié)構(gòu)和高孔隙率，便于干細胞在多孔凝膠內(nèi)部鋪展和相互交聯(lián)。同時多孔凝膠能緩慢釋放多種生長因子和細胞因子促進干細胞增殖。(3)本發(fā)明的方法簡便，低溫環(huán)境有利于生物活性分子的保存。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于材料技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種具有微米多孔結(jié)構(gòu)的富血小板裂解液血漿基水凝膠的制備方法。

背景技術(shù)

水凝膠具有內(nèi)部三維微孔結(jié)構(gòu)不僅有利于細胞在凝膠內(nèi)部遷移、鋪展和增殖，而且便于營養(yǎng)物質(zhì)與代謝產(chǎn)物的運輸傳遞，因而在生物醫(yī)藥領(lǐng)域包括干細胞培養(yǎng)、組織工程等具有廣泛的應(yīng)用前景。

生物體內(nèi)血液中血小板富含多種細胞因子和生長因子，能夠促進傷口愈合、骨修復和軟組織修復。如血小板通過脫顆粒作用釋放血小板源性生長因子(PDGF)能促進成骨細胞前體的有絲分裂；釋放血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)能夠促進新生血管的形成，釋放轉(zhuǎn)化生長因子-β(TGF-β)可誘導間充質(zhì)干細胞增殖及分化為成骨細胞，并促進膠原合成[I.Andia,N.Maffulli.Nat.Rev.Rheumatol.,2013,9,721]。由于血小板來源豐富、無毒并具有生物活性，利用血小板組分制備水凝膠在細胞培養(yǎng)、組織再生等方面已得到廣泛研究。目前，血小板衍生凝膠主要包括富血小板纖維蛋白凝膠和水凝膠復合血小板裂解液。前者通過鈣劑或凝血酶激活血小板形成纖維蛋白凝膠，但其內(nèi)部孔徑通常小于10微米，無法制備內(nèi)部大孔結(jié)構(gòu)的凝膠[R.J.Miron,J.Choukroun.et.al.Tissue Eng Part B Rev.,2017,23,83]。后者以膠原等水凝膠為主要基質(zhì)物理包裹血小板裂解液，血小板裂解液在凝膠中的質(zhì)量百分比不超過50％[S.T.Robinson,L.P.Brewster.et.al.Acta Biomater.,2016,36,86]。因此，制備以血小板組分為基質(zhì)并具有三維大孔結(jié)構(gòu)的多孔水凝膠具有重要的應(yīng)用價值，并且迄今為止尚未見報道。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種具微米多孔結(jié)構(gòu)的富血小板裂解液血漿基水凝膠。

本發(fā)明的第二個目的是提供一種具微米多孔結(jié)構(gòu)的富血小板裂解液血漿基水凝膠的制備方法。

本發(fā)明的技術(shù)方案概述如下：

具微米多孔結(jié)構(gòu)的富血小板裂解液血漿基水凝膠的制備方法，包括如下步驟：

1)向富血小板裂解液血漿凍干粉中加入pH＝7.2±0.3的磷酸緩沖液，配成質(zhì)量濃度為20％～60％的富血小板裂解液血漿溶液；

2)向交聯(lián)劑中加入pH＝7.2±0.3的磷酸緩沖液，配成質(zhì)量濃度為1％～3％的交聯(lián)劑溶液，加入EDC,震蕩反應(yīng)20～40分鐘，再加入NHS，混勻；所述EDC、NHS與交聯(lián)劑的摩爾比為(3～4):(1～1.2):1；所述EDC為1-乙基-3-(3-二甲基氨丙基)-碳化二亞胺的縮寫；NHS為N-羥基琥珀酰亞胺的縮寫；

3)在離心管中依次加入：a.步驟1)獲得的富血小板裂解液血漿溶液；b.質(zhì)量濃度為0.5毫克/毫升的羅丹明-牛血清蛋白水溶液；c.pH＝7.2±0.3的磷酸緩沖溶液；d.步驟2)獲得的液體；所述a:b:c:d的體積比為1：0.05：(0-3)：(0.67-6)；混勻后倒入模具中，在-10℃～-20℃，反應(yīng)16～30小時。

交聯(lián)劑優(yōu)選為粘均分子量≥2000cps的海藻酸鈉、數(shù)均分子量100000～200000透明質(zhì)酸或數(shù)均分子量100000的聚丙烯酸。

上述方法制備的具微米多孔結(jié)構(gòu)的富血小板裂解液血漿基水凝膠。