[發明專利]一種與光周期敏感的白菜類作物開花時間緊密連鎖的InDel分子標記及其應用

有效

• 申請號: 201810592942.1
• 申請日: 2018-06-08
• 公開（公告）號: CN108504769B
• 公開（公告）日: 2021-03-30
• 發明（設計）人: 肖棟;劉東讓;侯喜林;李英;張昌偉;劉同坤;王建軍;胡春梅
• 申請（專利權）人: 南京農業大學
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12Q1/6869;C12N15/11
• 代理公司: 南京天華專利代理有限責任公司 32218
• 代理人: 競存;徐冬濤

1.一種InDel分子標記在鑒定光周期敏感性的白菜類作物開花時間中的應用，其特征在于，所述InDel分子標記的核苷酸序列為ACCCTT，所述InDel分子標記的核苷酸序列位于SEQ ID NO.1所示序列的第727-732位，該ACCCTT序列存在于早花型光周期敏感的白菜類作物的CCA1基因編碼區，但不存在于晚花型光周期敏感的白菜類作物CCA1基因編碼區。

2.一種檢測權利要求1中所述的InDel分子標記的特異性引物對在鑒定光周期敏感性的白菜類作物開花時間中的應用，其特征在于，所述引物對的核苷酸序列如下所示：

正向引物：5′-CCATCATCAGTCCTTTCCTGA-3′(SEQ ID NO.5)，

反向引物：5′-AGCTAAAAGGAGCGCAGAGA-3′(SEQ ID NO.6)。

3.權利要求1中所述的InDel分子標記在光周期敏感性的白菜類作物選育中的應用。

4.權利要求2中所述的特異性引物對在光周期敏感性的白菜類作物選育中的應用。

5.根據權利要求1至4任一項所述的應用，其特征在于，包括如下步驟：

(1)提取光周期敏感的白菜類作物待測植株的基因組DNA；

(2)以待測植株的基因組DNA為模板，利用權利要求2中所述特異性引物對，進行PCR擴增反應；

(3)對PCR擴增產物測序，當測序結果顯示所測白菜類作物待測植株含有所述純合InDel標記時，為早開花型；所測白菜類作物待測植株缺失所述純合InDel標記，且所述缺失純合InDel標記的基因型不包括雜合情況時，為晚開花型。

6.根據權利要求5所述的應用，其特征在于，步驟(2)中，PCR擴增體系總體積為40μL：正、反向引物各2μL、模板cDNA 1μL、高保真酶MIX 20μL、ddH₂O 15μL；PCR反應程序為98℃預變性2min；98℃變性10s，55℃退火30s，72℃延伸10s，35個循環；72℃延伸5min；PCR擴增產物10℃保存。