[發(fā)明專利]選擇性識(shí)別致癌性突變體KIT ITD的單克隆抗體及其應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810588853.X
• 申請(qǐng)日: 2018-06-08
• 公開（公告）號(hào): CN108822212B
• 公開（公告）日: 2021-06-29
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉合力;丁煥弟;劉建梅;梁文君;徐飛;林兆晗;李志強(qiáng)
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 北京大學(xué)
• 主分類號(hào): C07K16/28
• 分類號(hào): C07K16/28;C12N15/13;A61K39/395;A61P35/00
• 代理公司: 北京萬(wàn)象新悅知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11360
• 代理人: 李稚婷

本發(fā)明公開了一種選擇性識(shí)別致癌性突變體KIT ITD的單克隆抗體及其應(yīng)用。所述抗體的重鏈和輕鏈的可變區(qū)中的高變區(qū)(CDRs)和框架區(qū)的特定序列共同決定了其對(duì)KIT ITD的選擇性，可選擇性抑制胃腸道間質(zhì)瘤中致癌性突變體KIT ITD。利用此抗體的可變區(qū)序列以及框架區(qū)序列，可制備人?鼠融合抗體或者人源化抗體，在臨床上用于治療KIT ITD類型的胃腸道間質(zhì)瘤。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及單克隆抗體，特別涉及一種選擇性抑制胃腸道間質(zhì)瘤中致癌性突變體KIT ITD功能的單克隆抗體及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

c-kit基因編碼的細(xì)胞表面受體KIT(被稱為CD117)，是第三類酪氨酸激酶家族的重要成員，在肥大細(xì)胞、正常造血干細(xì)胞等細(xì)胞中表達(dá)。作為單次跨膜蛋白，KIT胞內(nèi)區(qū)為酪氨酸激酶區(qū)，胞外含5個(gè)Ig樣的結(jié)構(gòu)域(D1-D5)；其中第五個(gè)Ig樣的結(jié)構(gòu)域及胞外近膜區(qū)，由外顯子9編碼。我們以及國(guó)際同行的研究發(fā)現(xiàn)，KIT受體的N-端三個(gè)Ig結(jié)構(gòu)域與配體SCF(干細(xì)胞生長(zhǎng)因子)結(jié)合后，受體發(fā)生二聚化，且近膜區(qū)的第四及第五個(gè)Ig樣結(jié)構(gòu)域會(huì)發(fā)生較大的構(gòu)象改變，從而使受體胞內(nèi)激酶區(qū)發(fā)生自磷酸化，繼而激活下游信號(hào)通路。

研究表明，在95％以上的胃腸道間質(zhì)瘤(GIST)患者中可見c-kit的高表達(dá)或致癌性突變，因此，KIT是GIST的分子標(biāo)志物，也是治療GIST的藥物靶標(biāo)。2002年FDA批準(zhǔn)的分子靶向藥物伊馬替尼，可抑制KIT受體的酪氨酸激酶活性，是治療GIST的一線治療藥物。在GIST患者中，c-kit基因的致癌性突變主要發(fā)生在外顯子9、11、13和17。其中，在外顯子9的致癌性突變，絕大多數(shù)為第502-503位殘基的內(nèi)部串聯(lián)重復(fù)突變(internal tandemduplication,ITD)；該類突變發(fā)生于10～15％的GIST患者中。KIT ITD最早被Lux等人于2000年發(fā)現(xiàn)，北京大學(xué)腫瘤醫(yī)院的沈琳和李健研究團(tuán)隊(duì)在我國(guó)的GIST患者中亦發(fā)現(xiàn)該類突變。KIT ITD特異性地發(fā)生于小腸，對(duì)伊馬替尼表現(xiàn)出原發(fā)性的耐藥性。有文章報(bào)道，相對(duì)于其他類型的GIST病人，KIT ITD病人在術(shù)后表現(xiàn)出更高的轉(zhuǎn)移特性，預(yù)后效果也更差。在離體細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中，已發(fā)現(xiàn)KIT ITD具有不依賴SCF的持續(xù)酪氨酸激酶活性，并對(duì)伊馬替尼表現(xiàn)低敏感性；KIT ITD類GIST病人的腫瘤組織，可以外種移植到小鼠成瘤。這些臨床觀察和實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：KIT ITD突變體可以作為一類GIST患者分子分型的標(biāo)記物，亦是驅(qū)動(dòng)胃腸道間質(zhì)瘤發(fā)生的重要分子。選擇性地抑制KIT ITD功能的藥理學(xué)工具，可望成為治療該類胃腸道間質(zhì)瘤的精準(zhǔn)藥物。

KIT作為單次跨膜蛋白，人們?cè)噲D發(fā)現(xiàn)針對(duì)其胞外區(qū)的、靶向治療GIST等癌癥的抗體類藥物，這符合FDA批準(zhǔn)單克隆抗體類抗癌藥物逐年增多的趨勢(shì)。KIT單抗的發(fā)現(xiàn)，早見于Broudy等人的工作，他們發(fā)現(xiàn)的SR-1單抗可以拮抗SCF與KIT的互作，削弱KIT信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，或降低GIST細(xì)胞表面KIT水平，或促進(jìn)巨噬細(xì)胞對(duì)GIST的吞噬從而提高免疫細(xì)胞對(duì)GSIT細(xì)胞的清除效率。另外一種以KIT與SCF的結(jié)合區(qū)為抗原決定簇的抗體為人源化的CK6，由Lebron等人發(fā)現(xiàn)，它可以有效地抑制SCF介導(dǎo)的KIT自磷酸化以及下游的MAPK-AKT信號(hào)通路，從而在細(xì)胞或整體動(dòng)物水平上抑制GIST的生長(zhǎng)。由Reshetnyak等人發(fā)現(xiàn)的、識(shí)別KIT第四個(gè)結(jié)構(gòu)域D4的抗體79D、KTN37和KNT0158，不僅可以有效抑制KIT穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞的增殖，而且也可以抑制KIT ITD穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞的增殖；Garton等人發(fā)現(xiàn)，KNT0158可以提高免疫檢查點(diǎn)抗體(anti-CTLA-4和anti-PD-1)的抗腫瘤效果。由Le Gall等人發(fā)現(xiàn)的、識(shí)別KIT D5的抗體2D1和3G1可以通過誘導(dǎo)受體內(nèi)化的機(jī)制，抑制穩(wěn)定表達(dá)野生型KIT或者伊馬替尼耐藥的KIT D816V突變體的白血病細(xì)胞增殖。但是，上述針對(duì)KIT的抗體，尚未進(jìn)入臨床研究，亦不能選擇性識(shí)別KITITD突變體。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種能選擇性識(shí)別致癌性突變體KIT ITD的單克隆抗體，以用于治療KIT ITD類胃腸道間質(zhì)瘤的藥物制備。