[發明專利]一種能特異性檢測EV71病毒的適配體及試劑盒

在審

• 申請號: 201810587893.2
• 申請日: 2018-06-08
• 公開（公告）號: CN108707607A
• 公開（公告）日: 2018-10-26
• 發明（設計）人: 不公告發明人
• 申請（專利權）人: 邵玉芹
• 主分類號: C12N15/115
• 分類號: C12N15/115;G01N33/68;G01N33/569
• 代理公司: 北京東方盛凡知識產權代理事務所(普通合伙) 11562
• 代理人: 宋平

本發明公開了一種可以特異性檢測EV71病毒的適配體和試劑盒及其應用。適配體的序列如SEQ ID No.1所示。該適配體可以特異性的結合EV71 VP2蛋白，并與該蛋白具有很好的親和能力。該適配體也可以制備成試劑盒用于檢測EV71病毒，具有靈敏度高，制備簡單，成本低廉，容易保存的優點。

技術領域

本發明屬于檢測領域，具體涉及一種可以特異性檢測EV71病毒的適配體及試劑盒。

背景技術

腸道病毒71型(EV71)屬于小RNA病毒科(Picornaradae)腸道病毒屬(Enterovirus)成員，歸屬于人類腸道病毒A。1974年Schmidt等人首次報道從美國加利福尼亞暴發的表現為神經系統癥狀疾病(1969～1973年)的患者中分離到EV71，隨后，世界上許多國家相繼報道了EV71病毒在不同地區的流行情況，EV71病毒已在世界范圍內引起多次暴發與流行，人們逐漸認識到EV71病毒是手足口病的主要病原。目前已知EV71的感染可以導致手足口病、皰疹性咽喉炎、無菌性腦膜炎等多種與神經系統相關的疾病。手足口病多發生于5歲以下兒童，表現口痛、厭食、低熱、手、足、口腔等部位出現小皰疹或小潰瘍，多數患兒一周左右自愈，少數患兒可引起心肌炎、肺水腫、無菌性腦膜腦炎等并發癥。個別重癥患兒病情發展快，導致死亡。目前缺乏有效治療藥物。而抗病毒治療一般在發病24小時到48小時前使用才是最佳的，因此，急需一些可以快速并靈敏檢測EV71病毒的方法，從而可以早發現早治療。

核酸適配體(Aptamer，又稱適配體，適配子)是能高親和性、高特異性的結合某種生物靶標的單鏈寡核酸分子(ssDNA或ssRNA)。核酸適配體是通過指數富集配體系統進化技術(Systematlc Evolutlon of Llgands by Exponentlal enrlchment，SELEX)從人工合成的DNA/RNA文庫中篩選得到的能夠高度特異性結合靶標分子的單鏈DNA/RNA。已報道核酸適配體的靶標包括金屬離子、有機小分子、多肽、蛋白質、細胞甚至組織等。核酸適配體的分子識別功能與抗體類似，具有與抗體分子相當甚至更強的靶標識別能力，但與抗體相比具有很多優良的特性，如分子量小，能批量生產，不易失活，無免疫原性、容易合成與標記、快速的穿透組織、良好的代謝動力學、不同批次之間產品不會存在差異和具有很好化學穩定性，在生物檢測、疾病診斷治療等領域具有重要的應用前景。

目前EV71的檢測方法包括病毒的分離培養法、逆轉錄聚合酶鏈反應、EV71中和抗體測定法、EV71-IgM膠體金免疫層析法、EV71抗體酶聯免疫吸附法、補體結合試驗等。但這些技術均有耗時長，靈敏度不高，成本高昂等缺點。因此，急需一種靈敏度高，時間短，成本低廉的檢測方法。而適配體則是解決上述問題的一種方法。中國專利號CN201110067159(一種檢測手足口病病原的納米探針芯片及其應用方法)公開了一個與EV71VP1區結合的適配體，但其也僅說明能夠與EV71進行結合，并未深入研究其結合率以及靈敏性和特異性。

因此，開發一種靈敏性高，穩定性好的EV71適配體的需求是非常迫切的，并且現有技術中還并未有針對EV71VP2的適配體。

發明內容

本發明的目的是提供一種可以特異性檢測EV71病毒的適配體及試劑盒。其具有靈敏度高，制備簡單，成本低廉，容易保存的優點。

本發明提供的核酸適配體，是如序列表的序列1所示的單鏈DNA(SEQ ID No.1)；

所述核酸適配體與EV71病毒VP2蛋白具有較好的親和能力。

還可將所述核酸適配體進行修飾或改造，得到所述核酸適配體的衍生物。

所述核酸適配體的衍生物可為如下任意一種：

a)將所述核酸適配體的骨架改造為硫代磷酸酯骨架，得到的與所述核酸適配體具有相同功能的核酸適配體的衍生物；

b)將核酸適配體改造為肽核酸，得到的與所述核酸適配體具有相同功能的核酸適配體的衍生物；