[發(fā)明專利]一種利用誘變微生物發(fā)酵技術(shù)制備大黃酸的方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810586556.1
• 申請(qǐng)日: 2018-06-06
• 公開（公告）號(hào): CN108715873A
• 公開（公告）日: 2018-10-30
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陳秀清
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 揚(yáng)州工業(yè)職業(yè)技術(shù)學(xué)院
• 主分類號(hào): C12P7/42
• 分類號(hào): C12P7/42;C12R1/80
• 代理公司: 北京中濟(jì)緯天專利代理有限公司 11429
• 代理人: 于躍

本發(fā)明涉及一種利用誘變微生物發(fā)酵技術(shù)制備大黃酸的方法，所述誘變方法是以保藏編號(hào)：CGMCC No.12762的菌株為誘導(dǎo)對(duì)象，以大黃酚為誘導(dǎo)藥物，以小劑量濃度遞增法進(jìn)行誘導(dǎo)，得到的耐大黃酚菌株P(guān)enicillium sp.R?02為在大黃酚濃度為4mg/mL時(shí)仍可穩(wěn)定生長并傳代的菌株；耐大黃酚菌株P(guān)enicillium sp.R?02可將濃度為大黃酚2?3g/L的大黃酚轉(zhuǎn)化為大黃酸。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于微生物發(fā)酵領(lǐng)域，具體涉及一種利用誘變微生物發(fā)酵技術(shù)制備大黃酸的方法。

背景技術(shù)

大黃酸是中藥蘆薈、大黃等的主要有效成分，屬單蒽核類1,8-二羥基蒽醌衍生物，含有2個(gè)羥基和1個(gè)羧基，具有抗腫瘤、抗菌、抗病毒、降糖調(diào)脂、保肝抗纖維化等多方面具有活性。本發(fā)明提供一種利用誘變微生物發(fā)酵技術(shù)將大黃酚轉(zhuǎn)化為大黃酸的制備工藝。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明提供一種大黃酸的制備方法，其特征在于包括如下步驟：

(1)將耐大黃酚菌株P(guān)enicillium sp.R-02接入配制好的種子培養(yǎng)基中，于26～28℃下，培養(yǎng)3天得種子培養(yǎng)液；

(2)取適量的步驟(1)中得到的種子培養(yǎng)液接入發(fā)酵培養(yǎng)基中，于26～28℃靜置培養(yǎng)8-12天，得發(fā)酵物；

(3)將步驟(2)得到的發(fā)酵物過濾，收集濾液，調(diào)pH至3-5，過濾收集沉淀并將沉淀置于飽和碳酸氫鈉溶液中，攪拌5-10min后，過濾收集濾液，調(diào)pH至3-5后過濾，沉淀經(jīng)水洗、無水乙醇洗，真空干燥后即得大黃酸。

步驟(1)中，耐大黃酚菌株P(guān)enicillium sp.R-02為在大黃酚濃度為4mg/mL時(shí)仍可穩(wěn)定生長并傳代的菌株；該菌株是以大黃酚為誘導(dǎo)藥物，以保藏編號(hào)：CGMCC No.12762的海洋真菌青霉Penicillium sp.HK1-6為誘導(dǎo)對(duì)象，制備得到的；每升種子培養(yǎng)基的配方如下：葡萄糖20g/L、酵母膏2g/L、蛋白胨2g/L、粗海鹽2.5g/L、碳酸鈉5g/L，余量為水；

步驟(2)中每升發(fā)酵培養(yǎng)基的配方如下：葡萄糖20g/L、酵母膏2g/L、蛋白胨2g/L、粗海鹽2.5g/L、碳酸鈉5g/L、大黃酚2-3g，余量為水。

本發(fā)明的另一實(shí)施方案提供上述耐大黃酚菌株P(guān)enicillium sp.R-02的制備方法，以保藏編號(hào)：CGMCC No.12762的海洋真菌青霉Penicillium sp.HK1-6為誘導(dǎo)對(duì)象，以大黃酚為誘導(dǎo)藥物，以小劑量濃度遞增法制備；其特征在于包括如下步驟：

在培養(yǎng)基中加入1.0μg/mL的大黃酚，接種保藏編號(hào)：CGMCC No.12762的菌株，挑選可正常生長并穩(wěn)定傳代的菌株，然后將該菌株接種在含大黃酚濃度為10μg/mL的培養(yǎng)基中，挑選可正常生長并穩(wěn)定傳代的菌株，然后將該菌株接種在含大黃酚濃度為20μg/mL的培養(yǎng)基中，挑選可正常生長并穩(wěn)定傳代的菌株，重復(fù)上述操作，所用培養(yǎng)基中的大黃酚濃度依次增加至50、100、200、500、1000、2000、3000、4000μg/mL，直至篩選出可以在4mg/mL濃度下，可正常生長并穩(wěn)定傳代的菌株，即為耐大黃酚菌株P(guān)enicillium sp.R-02。

本發(fā)明的另一實(shí)施方案提供上述耐大黃酚菌株P(guān)enicillium sp.R-02在制備大黃酸中的應(yīng)用。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于：通過使用大黃酚對(duì)真菌CGMCC No.12762進(jìn)行誘導(dǎo)，得到耐大黃酚菌株P(guān)enicillium sp.R-02，該菌株可以將大黃酚轉(zhuǎn)化為大黃酸，轉(zhuǎn)化操作簡便且轉(zhuǎn)化率高。

具體實(shí)施方式

為了便于對(duì)本發(fā)明的進(jìn)一步理解，下面提供的實(shí)施例對(duì)其做了更詳細(xì)的說明。但是這些實(shí)施例僅供更好的理解發(fā)明而并非用來限定本發(fā)明的范圍或?qū)嵤┰瓌t，本發(fā)明的實(shí)施方式不限于以下內(nèi)容。

實(shí)施例1