[發(fā)明專利]微粒計(jì)數(shù)的方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201810583361.1
• 申請日: 2018-06-05
• 公開（公告）號: CN108627448A
• 公開（公告）日: 2018-10-09
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 吳旭東;帥宇;董健;張羽;曹淙涵;李會娟
• 申請（專利權(quán)）人: 江蘇卓微生物科技有限公司
• 主分類號: G01N15/12
• 分類號: G01N15/12
• 代理公司: 北京超凡志成知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11371
• 代理人: 劉書芝

本發(fā)明提供了一種微粒計(jì)數(shù)的方法，涉及生物微粒檢測技術(shù)領(lǐng)域，本發(fā)明提供的微粒計(jì)數(shù)的方法，采用基于庫爾特原理的微流控芯片檢測技術(shù)，分析細(xì)胞和/或微生物樣品流過微流控芯片上檢測區(qū)域時產(chǎn)生的電脈沖信號，得到微粒的粒徑和數(shù)量。采用微流控芯片主要是通過芯片結(jié)構(gòu)設(shè)計(jì)(降低微流道深度)減少微粒樣品的分層懸浮問題，并結(jié)合光學(xué)系統(tǒng)的景深有效減小了圖像采集時由于微粒分層造成的計(jì)數(shù)誤差和細(xì)胞死活判別的誤差。光學(xué)鏡頭景深大于芯片深度，避免了分層懸浮造成的圖像特征差異。此外，芯片設(shè)計(jì)也使得加入的定量樣品能全部流經(jīng)檢測區(qū)域，從而實(shí)現(xiàn)全樣品計(jì)數(shù)。綜上，使得細(xì)胞或其他生物微粒的計(jì)數(shù)的結(jié)果準(zhǔn)確性和一致性大大優(yōu)于現(xiàn)有的檢測方法。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物微粒檢測技術(shù)領(lǐng)域，尤其是涉及一種微粒計(jì)數(shù)的方法。

背景技術(shù)

在大量的細(xì)胞生物研究實(shí)驗(yàn)中，需要對細(xì)胞或其他生物微粒進(jìn)行濃度檢測(定量計(jì)數(shù))，細(xì)胞懸液濃度(或數(shù)量)既是細(xì)胞培養(yǎng)的監(jiān)測參數(shù)，也是很多實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目中的必要參數(shù)，對于成功完成實(shí)驗(yàn)是非常基礎(chǔ)但卻很重要的過程條件。現(xiàn)有的計(jì)數(shù)手段主要包括采用細(xì)胞計(jì)數(shù)板的人工計(jì)數(shù)方法，基于圖像分析技術(shù)的自動化計(jì)數(shù)儀器，以及利用電阻法(庫爾特原理)的自動化計(jì)數(shù)儀器。

其中，人工計(jì)數(shù)方法最為普遍，實(shí)驗(yàn)人員將懸浮細(xì)胞樣品注入細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)池，在顯微鏡下以肉眼觀察并按規(guī)則進(jìn)行人工計(jì)數(shù)。此方法的主要缺點(diǎn)是：(1)由于計(jì)數(shù)池本身的深度數(shù)十倍于細(xì)胞尺度，這樣就會造成細(xì)胞樣品注入后在其中分層懸浮，從而觀察到的細(xì)胞形態(tài)會有所差別，造成計(jì)數(shù)結(jié)果的不準(zhǔn)確和細(xì)胞活性判斷錯誤；(2)按規(guī)則注入細(xì)胞計(jì)數(shù)板的樣品為10μL，但是在顯微鏡觀察區(qū)域內(nèi)的樣品量僅僅是一小部分，不足1μL，這樣細(xì)胞樣品在計(jì)數(shù)池內(nèi)分布是否均勻就會對結(jié)果造成很大的影響；(3)計(jì)數(shù)時是按照一定規(guī)則來人工計(jì)數(shù)的，操作人員水平的差異以及肉眼觀察導(dǎo)致的疲勞度就引入很大的人為誤差。

基于圖像分析技術(shù)的自動化儀器雖避免了肉眼觀察的困難，但是仍然存在以下不足：(1)引入了一次性計(jì)數(shù)片耗材的使用，增加了用戶檢測成本；(2)計(jì)數(shù)片在結(jié)構(gòu)上與細(xì)胞計(jì)數(shù)板類似，所以也存在計(jì)數(shù)板上細(xì)胞分層懸浮導(dǎo)致結(jié)果不準(zhǔn)確和活性誤判的問題；(3)同人工計(jì)數(shù)一樣，大部分基于圖像法的儀器存在檢測樣品量少導(dǎo)致的結(jié)果偏差大的問題。

傳統(tǒng)的庫爾特計(jì)數(shù)儀器整體的集成度都不高，比如要單獨(dú)配電腦，操作起來不夠簡捷。另外就是傳統(tǒng)庫爾特計(jì)數(shù)儀不具備細(xì)胞樣品活率評判的功能。

因此，提供一種誤差小、準(zhǔn)確度高且檢測成本低的微粒技術(shù)方法尤為重要。

有鑒于此，特提出本發(fā)明。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種微粒計(jì)數(shù)的方法，以緩解現(xiàn)有技術(shù)中存在的檢測樣品量少和細(xì)胞或其他生物微粒分層懸浮導(dǎo)致的結(jié)果不準(zhǔn)確的技術(shù)問題。

本發(fā)明提供了一種微粒計(jì)數(shù)的方法，所述方法包括：

利用微流控芯片技術(shù)使微粒樣品在檢測區(qū)域通過，檢測得到所述微粒的粒徑和數(shù)量；

所述檢測區(qū)域利用庫爾特原理，用于采集所述微粒通過時產(chǎn)生的電脈沖信號；

所述微粒包括細(xì)胞和/或微生物。

進(jìn)一步地，所述方法還包括：

利用微流控芯片技術(shù)使微粒樣品在圖像采集區(qū)域通過，檢測得到所述微粒的活率；

所述圖像采集區(qū)域用于連續(xù)采集所述微粒通過時的圖像，所述微粒為細(xì)胞；

優(yōu)選地，利用微流控芯片技術(shù)使微粒樣品在圖像采集區(qū)域通過，檢測得到所述微粒的活率，之后再利用微流控芯片技術(shù)使微粒樣品在檢測區(qū)域通過，檢測得到所述微粒的粒徑和數(shù)量。

進(jìn)一步地，應(yīng)用微粒計(jì)數(shù)儀對微粒進(jìn)行計(jì)數(shù)，所述微粒計(jì)數(shù)儀包括設(shè)有檢測區(qū)域的微流控芯片。