[發(fā)明專利]兩種辣椒果柄朝向的鑒定方法及其應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201810582011.3
• 申請日: 2018-06-07
• 公開（公告）號: CN110578013B
• 公開（公告）日: 2023-03-28
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 肖晗;江鑄顏;劉新華
• 申請（專利權(quán)）人: 中國科學(xué)院分子植物科學(xué)卓越創(chuàng)新中心
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12N15/11
• 代理公司: 上海專利商標(biāo)事務(wù)所有限公司 31100
• 代理人: 陳靜

1.特異性鑒定辣椒果柄朝向表型的方法，其特征在于，所述方法選自：

(a)鑒定待測辣椒的核酸序列，若存在雙拷貝的SEQ ID NO:9的核苷酸序列，則表明該待測辣椒為果柄朝上的表型，若僅存在單拷貝的SEQ ID NO:9的核苷酸序列，則表明該待測辣椒為果柄朝下的表型；或

(b)鑒定待測辣椒的核酸序列，若在SEQ ID NO:3所示序列區(qū)域的第27位為堿基G，則表明該待測辣椒為果柄朝上的表型，若第27位為堿基C，則表明該待測辣椒為果柄朝下的表型。

2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，采用測序法，PCR擴(kuò)增法，探針法，雜交法，芯片法，限制性酶切分析法，等位基因多態(tài)性分析法進(jìn)行核酸序列的鑒定。

3.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，通過PCR擴(kuò)增的方法鑒定該SEQ ID NO:9的核苷酸序列的單拷貝或雙拷貝存在形式，以及鑒定SEQ IDNO:3所示序列區(qū)域的第27位堿基。

4.如權(quán)利要求1或3所述的方法，其特征在于，(a)中，對待測辣椒進(jìn)行PCR擴(kuò)增，若是存在SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列，則表明其為果柄朝上的表型；若是存在SEQ ID NO:2所示的核苷酸序列，則表明其為果柄朝下的表型。

5.如權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于，以SEQ ID NO:5和SEQ IDNO:6所示的引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，若是擴(kuò)增產(chǎn)物為332bp，則表明其為果柄朝上的表型；若是僅出現(xiàn)295bp擴(kuò)增產(chǎn)物，或同時出現(xiàn)332bp和295bp兩種擴(kuò)增產(chǎn)物，則表明其為果柄朝下的表型。

6.如權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，通過電泳的方法來確定擴(kuò)增產(chǎn)物的大小。

7.如權(quán)利要求1或3所述的方法，其特征在于，(b)中，對待測辣椒進(jìn)行PCR擴(kuò)增，若是存在SEQ ID NO:3所示的核苷酸序列，則表明其為果柄朝上的表型；若是存在SEQ ID NO:4所示的核苷酸序列，則表明其為果柄朝下的表型。

8.如權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于，以SEQ ID NO:7和SEQ IDNO:8所示的引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，并以限制性內(nèi)切酶DpnII酶切擴(kuò)增產(chǎn)物，若不能被酶切，則表明其為果柄朝上的表型；若能被酶切，則表明其為果柄朝下的表型。

9.如權(quán)利要求8所述的方法，其特征在于，通過電泳的方法來確定是否被酶切以及酶切產(chǎn)物大小：若不能被酶切，存在191bp電泳條帶，則表明其為果柄朝上的表型；若能被酶切，產(chǎn)生23bp和168bp兩條電泳條帶，或產(chǎn)生23bp、168bp和191bp三條電泳條帶，則表明其為果柄朝下的表型。

10.多核苷酸或多態(tài)性位點(diǎn)作為特異性鑒定辣椒果柄朝向表型的分子標(biāo)記的應(yīng)用，所述的多核苷酸的核苷酸序列如SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4和/或SEQ ID NO:9；或所述的多態(tài)性位點(diǎn)為：SEQ ID NO:3所示序列區(qū)域的第27位堿基。

11.引物作為特異性鑒定辣椒果柄朝向表型的試劑的應(yīng)用，所述的引物特異性擴(kuò)增含有SEQ ID NO:9區(qū)域的核酸片段；或

所述的引物特異性擴(kuò)增含有多態(tài)性位點(diǎn)的片段，該多態(tài)性位點(diǎn)為：SEQ ID NO:3所示序列區(qū)域的第27位堿基。

12.如權(quán)利要求11所述的應(yīng)用，其特征在于，所述引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6所示，特異性擴(kuò)增含有SEQ ID NO:9區(qū)域的核酸片段。

13.如權(quán)利要求11所述的應(yīng)用，其特征在于，所述引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:8所示，特異性擴(kuò)增含有多態(tài)性位點(diǎn)的片段，該多態(tài)性位點(diǎn)為：SEQ ID NO:3所示序列區(qū)域的第27位堿基。