[發明專利]孔雀石綠和隱性孔雀石綠降解菌及其分離純化方法和應用

有效

• 申請號: 201810581423.5
• 申請日: 2018-06-07
• 公開（公告）號: CN108795804B
• 公開（公告）日: 2021-08-06
• 發明（設計）人: 劉菁華;孫振中;張玉平;劉淑梅;孫建華;晏軍;黃雪玲
• 申請（專利權）人: 上海市水產研究所
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N1/36;C02F3/34;C12R1/01;C02F101/38;C02F103/20
• 代理公司: 上海旭誠知識產權代理有限公司 31220
• 代理人: 鄭立

本發明公開了一種孔雀石綠和隱性孔雀石綠降解菌，所述降解菌為腸桿菌屬(Enterobacter sp.)的菌株D6，保藏于中國典型培養物保藏中心(CCTCC)，保藏日期為2018年3月16日，保藏編號為CCTCC No.M 2018133，所述菌具有同時降解漁業養殖環境中孔雀石綠及其代謝產物隱性孔雀石綠的能力。本發明的孔雀石綠和隱性孔雀石綠降解菌可安全、高效、快速的同時降解漁業養殖環境中殘留孔雀石綠和隱性孔雀石藥物，在漁業生態環境保護、養殖環境藥物殘留污染治理和保障食品安全方面具有很好的應用前景。

技術領域

本發明涉及生物技術領域，尤其涉及一種孔雀石綠和隱性孔雀石綠降解菌及其分離純化方法和應用。

背景技術

孔雀石綠(Malachite green，MG)又名堿性綠、鹽基塊綠、孔雀綠，為暗綠色結晶固體，孔雀石綠作為工業用染色劑和細胞化學染色劑等被廣泛應用。1933年，研究發現孔雀石綠具有抗菌的藥效，之后許多國家開始將孔雀石綠廣泛用作殺菌劑，主要用于殺滅養殖水體環境中的寄生蟲和魚卵中的霉菌等。孔雀石綠在水生動物體內代謝成無色隱性孔雀石綠(Leucomalachite green，LMG)，孔雀石綠和無色隱性孔雀石綠易在水生動物體內長時間殘留，產生高度致畸、致癌和致突變效應，隱性孔雀石綠具有很強的脂溶性，能與脂肪牢固結合，因此殘留毒性比孔雀石綠更強。因此漁業養殖過程中投放到漁業養殖環境的孔雀石綠藥物，一方面增加了動物對孔雀石綠的吸收以及孔雀石綠在動物體內的殘留，另一方面未被動物吸收的殘留孔雀石綠藥物以及經水生動物代謝出的隱性孔雀石綠在漁業水體中積累，并隨水中懸浮顆粒沉降，吸附到池塘底泥中，通過生物富集作用對養殖生態系統和水產品質量產生不利。因此，孔雀石綠藥物和隱性孔雀石綠殘留引起的漁業養殖環境污染問題受到人們的普遍關注，如何有效的去除孔雀石綠藥物和隱性孔雀石綠的殘留污染和進行監控對保護和修復漁業生態環境、發展綠色養殖和保障食品安全具有重要意義。

目前，對養殖環境及水產品中藥物殘留的質量控制，主要是對其藥物殘留情況進行監控，不能從根本上解決藥物對環境及水產品的污染。現有技術中，針對水產養殖環境及水產品中孔雀石綠及隱性孔雀石綠的殘留的去除方法較多采用物理法、化學及微生物方法從養殖源頭降解消除孔雀石綠及其代謝產物的殘留問題，微生物法是以微生物降解作為環境中藥物降解的主要方式，現有技術主要集中在土壤、堆肥和城市污水等環境的殘留藥物降解，而對于漁業養殖環境中殘留藥物的微生物降解研究少，經檢索在漁業養殖環境中孔雀石綠藥物和隱性孔雀石綠殘留的微生物降解研究也極少，還未見有在漁業養殖環境中孔雀石綠和隱性孔雀石綠藥物殘留的微生物降解菌的公開報道。

因此，本領域的技術人員致力于開發一種孔雀石綠和隱性孔雀石綠降解菌及其分離純化方法和應用。

發明內容

有鑒于現有技術的上述缺陷，本發明所要解決的技術問題是現有在漁業養殖環境中孔雀石綠藥物和隱性孔雀石綠殘留對養殖生態系統和水產品質量產生不利，在漁業養殖環境中孔雀石綠和隱性孔雀石綠微生物降解菌未見公開報道。

為實現上述目的，本發明提供了一種孔雀石綠和隱性孔雀石綠降解菌，該菌為腸桿菌屬(Enterobacter sp.)的菌株D6，該菌株保藏于中國典型培養物保藏中心(CCTCC；地址：武漢市武昌珞珈山，武漢大學，郵編：430072)，保藏日期為2018年3月16日，保藏編號為CCTCC M 2018133，該菌具有同時降解漁業養殖環境中孔雀石綠及其代謝產物隱性孔雀石綠的能力。

進一步地，所述降解菌的16S rDNA的序列如SEQ ID No.1所示；

進一步地，所述孔雀石綠和隱性孔雀石綠降解菌，屬于革蘭氏染色陰性、桿菌；精氨酸雙水解試驗、賴氨酸脫羧酶試驗、明膠液化試驗、β-半乳糖苷酶、鳥氨酸脫羧酶反應陰性；山梨醇、乳糖、鼠李糖、葡萄糖試驗陽性；

進一步地，所述孔雀石綠和隱性孔雀石綠降解菌，在漁業養殖環境中生長，最適生長溫度28-35℃，最適生長pH為7.0-7.5，在固體培養基上，菌落圓形、較薄，呈白色，半透明；