[發明專利]一種慢性腎小球疾病腎小球硬化標志物及其檢測試劑盒

在審

• 申請號: 201810580022.8
• 申請日: 2018-06-07
• 公開（公告）號: CN108728400A
• 公開（公告）日: 2018-11-02
• 發明（設計）人: 馬坤嶺;魯薦
• 申請（專利權）人: 東南大學
• 主分類號: C12N5/071
• 分類號: C12N5/071;G01N33/569
• 代理公司: 南京蘇高專利商標事務所(普通合伙) 32204
• 代理人: 孫斌

本發明公開了一種慢性腎小球疾病腎小球硬化標志物及其檢測試劑盒，所述標志物為尿液中足細胞微粒。本發明的足細胞微粒具有特定雙層膜結構的細胞外囊泡，利用流式細胞儀的方法鑒定慢性腎小球疾病患者尿液中足細胞微粒，并通過進一步的試驗發現尿液中足細胞微粒在慢性腎小球疾病患者甚至在不同程度的腎小球硬化中差異表達，檢測待測樣本中尿液中足細胞微粒數量，能夠判斷或者輔助判斷慢性腎小球疾病腎小球硬化的發生和/或發展，確定尿液中足細胞微粒能夠作為慢性腎小球疾病腎小球硬化篩查或者輔助篩查診斷的標志物。同時本發明的檢測試劑盒配合流式細胞儀可以有效檢測尿液中足細胞微粒的釋放水平。

技術領域

本發明屬于生物醫學技術領域，具體涉及一種慢性腎小球疾病腎小球硬化標志物及其檢測試劑盒。

背景技術

腎臟病的診斷金標準是“腎穿刺活檢術”取得腎臟組織行病理檢查，但該檢查屬于有創操作并在臨床工作上難以重復。尿液中含有豐富的生物學信息，包括蛋白，mRNA等，整個尿路系統的病理生理改變均會導致尿液中成分改變，因此尿液是獲取泌尿系統中各種細胞生物學狀態的重要窗口，也可輔助監測疾病的進展和治療效果。微粒是一種直徑在100-1000nm的由細胞激活或凋亡產生的細胞外囊泡，主要是由于細胞膜出泡形式而產生，因此攜帶有母本細胞的細胞膜蛋白和mRNA等遺傳學信息。微粒還能表征母本細胞的損傷情況。

足細胞是腎臟細胞的一種，也是腎臟中濾過屏障的重要組成部分，但其幾乎無再生能力，許多免疫因素和糖尿病等代謝性因素均容易導致足細胞損傷，因此篩查和監測足細胞損傷和腎小球硬化的程度，特別是早期篩查和輔助診斷，有利于慢性腎小球疾病患者腎小球硬化的盡早發現以及跟蹤判斷，能夠早期進行藥物干預延緩腎臟病的進展，意義重大。

CKD早期起病隱匿、不易發現，目前臨床上主要以尿微量白蛋白排泄率(urinaryalbumin excretion rate，UAER)作為判斷CKD進展的檢測指標，然而該指標存在一定的局限性，譬如，CKD初期盡管病變在進展，但UAER尚在正常范圍內，無法進行監測，并且檢測結果與臨床實際情況有時也存在一定的偏差。而通過檢測肌酐估算的腎小球濾過率(estimated glomerular filtration rate，eGFR)存在一定的滯后性，血清肌酐清除率下降的時間遲于腎臟本身的病變發生和進展的時間。腎活檢是診斷CKD腎臟病理變化的“金標準”，但該檢查具有一定的創傷性，臨床難以反復進行。因此，尋找早期、無創、精準反映CKD進展的生物標志物已成為當前腎臟病研究領域亟待解決的重要科學問題。以往有研究者發現在糖尿病大鼠尿液中足細胞微粒的釋放早于微量白蛋白尿的產生。

發明內容

發明目的：針對現有技術存在的問題，本發明一種慢性腎小球疾病腎小球硬化標志物，所稱的標志物為尿液中足細胞微粒，該足細胞微粒具有特定雙層膜結構的細胞外囊泡，利用流式細胞儀的方法，鑒定慢性腎小球疾病患者尿液中足細胞微粒，尿液中足細胞微粒在慢性腎小球疾病患者甚至在不同程度的腎小球硬化中差異表達，檢測待測樣本中尿液中足細胞微粒數量，能夠判斷或者輔助判斷慢性腎小球疾病腎小球硬化的發生和/或發展，確定尿液中足細胞微粒能夠作為慢性腎小球疾病腎小球硬化篩查或者輔助篩查診斷的標志物。

本發明還提供一種慢性腎小球疾病腎小球硬化標志物的檢測試劑盒。

技術方案：為了實現上述目的，如本發明所述一種慢性腎小球疾病腎小球硬化標志物，其特征在于，所述標志物為尿液中足細胞微粒。

所述足細胞微粒為足細胞在激活或發生凋亡時細胞膜出芽釋放的直徑在100-1000nm大小的雙層膜囊泡狀結構，而非外泌體，該足細胞微粒具有特定雙層膜結構的細胞外囊泡。

所述標志物能夠攜帶足細胞特異性膜蛋白podocalyxin。