[發明專利]一種高抗氨芐西林植物乳桿菌、其選育方法及應用

有效

• 申請號: 201810577667.6
• 申請日: 2018-06-07
• 公開（公告）號: CN108690820B
• 公開（公告）日: 2021-02-12
• 發明（設計）人: 張文羿;王記成
• 申請（專利權）人: 內蒙古農業大學
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N1/36;A23L33/135;C12R1/25
• 代理公司: 北京君智知識產權代理事務所(普通合伙) 11305
• 代理人: 黃綠雯

本發明涉及一種高抗氨芐西林植物乳桿菌(Lactobacillus plantarum)Amp及其選育方法。所述菌株是通過出發菌株活化培養、含氨芐西林培養液培養、無氨芐西林培養液培養、進化菌株耐藥性的檢測等步驟，通過耐藥試驗，證實所得菌株植物乳桿菌Amp對氨芐西林具有高耐藥性的特征，在連續繼代培養8個月后最小抑制濃度達到16μg/mL，這一特征可確保植物乳桿菌Amp制品與氨芐西林同時服用時保持較高的活力。

【技術領域】

本發明屬于生物技術領域。更具體地，本發明涉及一種高抗氨芐西林植物乳桿菌(Lactobacillusplantarum)，還涉及這株高抗氨芐西林植物乳桿菌的選育方法。

【背景技術】

植物乳桿菌在食品工業中應用十分廣泛，可作為人體胃腸道益生菌，具有維持腸道內菌群平衡、提高機體免疫力和促進營養物質吸收等作用。通常，服用抗生素期間不建議食用益生菌制品。有研究表明，益生菌和抗生素同時存在可能會導致益生菌的活力減弱，甚至死亡，影響其發揮特有的生理功效。這對日常生活過程中習慣食用益生菌制品的人群極為不利。但事實上，近年來越來越多的臨床研究證據表明，如果能夠與某些抗菌藥物聯合應用，其治療一些疾病的效果則更為理想。從這個角度講，理想的微生態制劑應該對經常用的抗菌藥物有較高的相容性，同時對經常使用的治療藥物具有較高的抗性。因此，采用行之有效的方法選育具有優良耐藥特性的植物乳桿菌已經成為時代發展的客觀需求。

氨芐西林屬于廣譜半合成青霉素類抗生素，常常作為一線藥物用于腸球菌、痢疾桿菌、傷寒桿菌、大腸桿菌、李斯特菌和奇異變形桿菌等細菌感染所致的疾病治療，如泌尿系統、呼吸系統、膽道、腸道感染以及腦膜炎、心內膜炎等。目前在中國的抗生素藥物市場中占有很大的份額，廣泛應用于相關疾病的治療。圍繞這一抗生素選育具有耐藥性的植物乳桿菌具有非常重要的意義。

本發明針對植物乳桿菌的抗氨芐西林特性，依據參考文獻自行設計了一種基于自然選擇的選育方法。這種方法是利用微生物在特定生長條件下的適應性進化實現菌種選育，因為具有安全顯效的特點而備受歡迎。通過耐藥實驗，我們證實所得植物乳桿菌Amp對氨芐西林有高耐藥性的特征，該特征可確保植物乳桿菌Amp制品在與氨芐西林同時服用時維持較高的活力，最終篩選出能夠耐受一定濃度抗生素的益生菌菌種，以期能夠指導益生菌的微生態制劑和抗生素聯合使用。這一方法的建立可為我國傳統發酵乳制品及微生態制劑中高抗氨芐西林乳酸菌的研究、開發和利用奠定堅實的基礎。

【發明內容】

本發明的目的是基于自然選擇的方法對植物桿菌抗氨芐西林特性進行選育，提供一株高抗氨芐西林植物乳桿菌。

進一步地，本發明還提供這種高抗氨芐西林植物菌的選育方法，及其在作為食品或食品添加劑的使用。

為了實現上述目的，本發明提供一種高抗氨芐西林植物乳桿菌(Lactobacillusplantarum)Amp，該菌株已于2018年04月25日在北京市朝陽區北辰西路1號院3號中國科學院微生物研究所中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心保藏，其保藏號為CGMCC No.15741。

在本發明中，所述高抗氨芐西林植物乳桿菌Amp的最小抑菌濃度(Minimuminhibitory concentration，MIC)為16μg/mL。

進一步地，本發明還提供一株高抗氨芐西林植物乳桿菌的選育方法，所述選育方法包括下述步驟：

A、菌株活化培養

取分離自內蒙古地區傳統自然發酵酸粥樣品的植物乳桿菌(Lactobacillusplantarum)LC，在液體MRS培養基中在活化，傳代培養3代，然后將得到的培養液在固體MRS平板上劃線，在37℃培養72h，隨機選取三個單菌落作為出發菌株，在MRS培養基中活化傳代培養3代，然后凍干保藏，它們分別命名為植物乳桿菌LC-1、植物乳桿菌LC-2和植物乳桿菌LC-3；