[發(fā)明專利]一種靜注人免疫球蛋白的提純方法

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• 申請?zhí)枺?/td>: 201810576441.4
• 申請日: 2018-06-06
• 公開（公告）號(hào): CN108623677A
• 公開（公告）日: 2018-10-09
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉余江;滕世超;楊柳;周康森;張寶獻(xiàn);李長明
• 申請（專利權(quán)）人: 華蘭生物工程重慶有限公司;華蘭生物工程股份有限公司
• 主分類號(hào): C07K16/00
• 分類號(hào): C07K16/00;C07K1/36;C07K1/34;C07K1/18
• 代理公司: 重慶中之信知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 50213
• 代理人: 張景根

1.一種靜注人免疫球蛋白的提純方法，對經(jīng)低溫乙醇法得到的二次沉淀組分進(jìn)行提純，其特征在于：所述靜注人免疫球蛋白的提純方法包括如下步驟：

S1溶解：用相當(dāng)于二次沉淀組分體積5～10倍的注射用水溶解二次沉淀組分，并在2.0～8.0℃下攪拌2～4小時(shí)，得溶解液；

S2過濾：過濾溶解液，先用0.45μm孔徑過濾，再用0.2μm孔徑過濾，得過濾液；

S3調(diào)整過濾液：調(diào)整過濾液的pH為5.60～6.00，蛋白濃度為10～13g/L，電導(dǎo)率為0.20～1.90ms/cm，得層析前溶液；

S4層析：利用強(qiáng)陰離子交換凝膠進(jìn)行層析，層析前，先對凝膠進(jìn)行沖洗平衡：平衡至凝膠的pH與層析前溶液的pH值差值為-0.10～0.10；

依據(jù)層析前溶液的蛋白濃度，按照層析載量不高于600g/L凝膠層析上樣，控制流速為0.5～1.5cm/min線性流速，并收集層析后溶液，

層析結(jié)束后，用洗脫液將吸附于凝膠上的雜質(zhì)沖洗下來，得雜質(zhì)溶液。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種靜注人免疫球蛋白的提純方法，其特征在于：所述步驟S2中的過濾壓力不超過0.15MPa。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種靜注人免疫球蛋白的提純方法，其特征在于：所述步驟S3調(diào)整過濾液的pH用1.0mol/L醋酸溶液，并控制醋酸加入的速度在300～400ml/min。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種靜注人免疫球蛋白的提純方法，其特征在于：所述步驟S3中用平衡液調(diào)整過濾液蛋白濃度、電導(dǎo)率，所述平衡液包括pH為5.60～6.00的0.025mol/L醋酸鹽緩沖液、pH為5.60～6.00的0.0025mol/L醋酸鹽緩沖液、注射用水其中一種或多種組合。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種靜注人免疫球蛋白的提純方法，其特征在于：所述步驟S4層析前對凝膠進(jìn)行平衡包括如下步驟：按1.5～3.0cm/min的線性流速分別用0.5mol/L氫氧化鈉溶液、pH為5.60～6.00的0.025mol/L醋酸鹽緩沖液、pH為5.60～6.00的0.0025mol/L醋酸鹽緩沖液進(jìn)行沖洗平衡。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種靜注人免疫球蛋白的提純方法，其特征在于：步驟S1中所述注射用水的溫度為2～8℃，且注射用水用于溶解二次沉淀組分前檢查內(nèi)毒素，內(nèi)毒素檢查合格后再使用。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種靜注人免疫球蛋白的提純方法，其特征在于：對溶解液、過濾液、層析后溶液進(jìn)行取樣測量蛋白質(zhì)濃度、pH、電導(dǎo)率，用以指導(dǎo)下一步的操作。