[發(fā)明專利]南蛇藤提取物含藥血清對HBV和MIF作用的研究方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201810575203.1
• 申請日: 2018-06-06
• 公開（公告）號: CN110564835A
• 公開（公告）日: 2019-12-13
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 屈正;邵馨怡;邱朋;王梓嶧;范睿
• 申請（專利權(quán)）人: 屈正
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883;C12Q1/02
• 代理公司: 37108 山東濟南齊魯科技專利事務(wù)所有限公司
• 代理人: 劉棟棟

本發(fā)明涉及一種南蛇藤提取物含藥血清對HBV和MIF作用的研究方法。該南蛇藤提取物含藥血清對HBV和MIF作用的研究方法按順序包括：南蛇藤提取物含藥血清的制備過程，人骨髓間充質(zhì)干細胞分離、培養(yǎng)、純化過程，乙肝病毒體外自然感染人骨髓間充質(zhì)干細胞的過程，南蛇藤提取物含藥血清處理感染了HBV的人骨髓間充質(zhì)干細胞的過程，結(jié)果檢測過程，統(tǒng)計學(xué)分析過程。本發(fā)明明確南蛇藤素對人類乙型肝炎的藥用價值，為突破乙型肝炎奠定基礎(chǔ)。明確給藥后人BMSCs中HBsAg、HBeAg、HBcAg、MIF的量的變化趨勢、HBVcccDNA的表達水平及MIF基因表達情況，為下一步探究南蛇藤素的作用機制提供數(shù)據(jù)支持。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種南蛇藤提取物的研究方法，具體為南蛇藤提取物含藥血清對HBV和MIF作用的研究方法。

背景技術(shù)

乙型肝炎病毒，簡稱HBV,感染人體后導(dǎo)致乙型病毒性肝炎（hepatitis B），是我國傳染病死亡的重要原因之一，常伴有肝硬化、肝癌等并發(fā)癥，病死率高。研究認為，乙型病毒性肝炎與機體免疫應(yīng)答異常、細胞因子網(wǎng)絡(luò)活化密切相關(guān)。現(xiàn)階段治療多以藥物抑制HBV的復(fù)制和數(shù)量的治療方法為主。

巨噬細胞遷移抑制因子（MIF）是一種重要的前炎癥因子，主要作用為抑制巨噬細胞的游走移動，促進巨噬細胞在炎癥局部浸潤、聚集、增生、活化，增強其粘附、吞噬作用，還能促進多種炎癥細胞因子的生成。MIF 的廣泛參與炎癥反應(yīng)和腫瘤生成等，研究表明MIF在乙型肝炎發(fā)病機制中起重要作用。

南蛇藤素有抗發(fā)炎作用，早在清代吳其濬撰寫的《植物名實圖考》中，就有過“行血氣。治無名腫毒”的記載。現(xiàn)研究表明，南蛇藤素在原代肝細胞水平能夠抑制HBV-DNA 的復(fù)制，還可以有效地抑制HBsAg 的表達。

本實驗通過南蛇藤提取物作用于感染了HBV 的人BMSCs，通過觀察加入南蛇藤素前后MIF 表達能力的差異，探究南蛇藤素對乙肝治療的作用。通過該實驗，理論上能夠進一步提高對南蛇藤素治療價值的認識水平，為乙肝的相關(guān)影響因素提供新的實驗依據(jù)，臨床上能為乙肝的診治提供新的治療思路從而更好的輔助乙肝的治療。

乙型肝炎病毒，縮寫為HBV，是雙鏈DNA 病毒1，屬Orthohepadnavirus2，為Hepadnaviridae 病毒家族的成員。感染人體后導(dǎo)致乙型病毒性肝炎（hepatitis B），簡稱乙肝，是由乙型肝炎病毒感染后，引起的肝臟急性或慢性發(fā)炎之疾病。乙肝病毒傳染途經(jīng)為接觸到受感染的體液，特別由血液感染占最大宗4。據(jù)估計，全球每三人當(dāng)中，就會有一個人曾經(jīng)被乙型肝炎病毒感染，而其中約有2.4億至3.5億人會轉(zhuǎn)變成慢性肝炎。乙型肝炎與肺結(jié)核、血吸蟲病和艾滋病并列為中國四大傳染病。

南蛇藤素：南蛇藤素(celastrol) 為一種醌甲基化三萜化合物(quinonemethidetriterpene)7，其醌甲基化的結(jié)構(gòu)可與半胱胺酸殘基(residues) 的硫基反應(yīng)，形成共價蛋白鍵結(jié)物，又稱為雷公藤三萜醇或雷公藤紅素，也是雷公藤根部的藥理活性成份之一。南蛇藤素具有抗發(fā)炎、抗癌、緩解自體免疫疾病(如：類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、全身性紅斑性狼瘡)、及調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)平衡(proteostasis) 疾病的作用9。現(xiàn)研究表明，南蛇藤素在原代肝細胞水平能

夠抑制HBV-DNA 的復(fù)制，還可以有效地抑制HBsAg 的表達。

國內(nèi)外研究現(xiàn)狀，目前國內(nèi)外對于HBV 的研究愈發(fā)深入，特別是對母嬰傳播的疫苗預(yù)防，已經(jīng)成為每個國家計劃免疫的基礎(chǔ)與重點。但對于已發(fā)病患者，由于現(xiàn)階段仍沒有一種藥物直接針對HBV 的cccDNA，易導(dǎo)致乙肝復(fù)發(fā)。目前仍無法有效治愈乙型肝炎。世衛(wèi)組織建議使用替諾福韋或恩替卡韋進行口服治療，是目前抑制乙型肝炎病毒的最有效藥物。巨噬細胞遷移抑制因子（Macrophage migration inhibitory factor MIF），也被稱為糖基化抑制因子（GIF）。是在人中由MIF 基因編碼的蛋白質(zhì)10.11。MIF 是先天免疫的重要調(diào)