[發明專利]基于CRISPR的基因組修飾和調控在審
| 申請號： | 201810574719.4 | 申請日： | 2013-12-05 |
| 公開（公告）號： | CN108913676A | 公開（公告）日： | 2018-11-30 |
| 發明（設計）人： | F.陳;G.D.戴維斯 | 申請（專利權）人： | 西格馬－奧爾德里奇有限責任公司 |
| 主分類號： | C12N9/22 | 分類號： | C12N9/22;C12N9/96;C12N15/10;C12N15/82;C12N5/10;A61K38/46 |
| 代理公司： | 中國專利代理(香港)有限公司 72001 | 代理人： | 黃登高;黃希貴 |
| 地址： | 美國密*** | 國省代碼： | 美國;US |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 融合蛋白 結構域 核酸內切酶 染色體序列 真核細胞 效應子 修飾 胚胎 轉錄激活結構域 基因組修飾 靶基因組 工程改造 剪切結構 遺傳修飾 轉錄抑制 子結構 調控 蛋白 | ||
1.一種工程化RNA指導的核酸內切酶復合物，其包含：
指導RNA，其包含：
(i)與真核生物染色體序列中的靶位點互補的第一區域，所述第一區域可與靶位點堿基配對，所述第一區域包含約10個核苷酸至超過約25個核苷酸，
(ii)形成莖和環結構的第二區域，和
(iii)基本單鏈的第三區域，
其中(i)、(ii)和(iii)以5'至3'方向排列，并且指導RNA包含兩個分開的分子，
其中在指導RNA和II型CRISPR/Cas9蛋白之間形成蛋白-RNA復合物，其進一步包含核定位信號，并且通過指導RNA、II型CRISPR/Cas9蛋白和靶位點之間的相互作用將蛋白-RNA復合物指導至靶位點。
2.權利要求1的工程化RNA指導的核酸內切酶復合物，其中指導RNA的第二區域的長度為約16個至約60個核苷酸。
3.權利要求1或2的工程化RNA指導的核酸內切酶復合物，其中指導RNA的第三區域的長度為約5個至約60個核苷酸。
4.權利要求1至3中任一項的工程化RNA指導的核酸內切酶復合物，其中指導RNA的第一分子包含指導RNA的第一區域和指導RNA的第二區域的莖的一半。
5.權利要求1至4中任一項的工程化RNA指導的核酸內切酶復合物，其中指導RNA的第二分子包含指導RNA的第二區域的莖的另一半和指導RNA的第三區域。
6.權利要求1至5中任一項的工程化RNA指導的核酸內切酶復合物，其中II型CRISPR/Cas9蛋白僅包含一個功能性核酸酶結構域。
7.權利要求6的工程化RNA指導的核酸內切酶復合物，其中II型CRISPR/Cas9蛋白包含非功能性RuvC樣結構域。
8.權利要求6的工程化RNA指導的核酸內切酶復合物，其中II型CRISPR/Cas9蛋白包含非功能性HNH樣結構域。
9.權利要求1至8中任一項的工程化RNA指導的核酸內切酶復合物，其中II型CRISPR/Cas9蛋白來自鏈球菌物種。
10.權利要求9的工程化RNA指導的核酸內切酶復合物，其中II型CRISPR/Cas9蛋白來自釀膿鏈球菌。
11.權利要求1至10中任一項的工程化RNA指導的核酸內切酶復合物，其中II型CRISPR/Cas9蛋白由針對真核表達優化的DNA編碼。
12.權利要求11的工程化RNA指導的核酸內切酶復合物，其中DNA可操作連接至啟動子控制序列用于真核表達。
13.權利要求11或12的工程化RNA指導的核酸內切酶復合物，其中編碼工程化RNA指導的核酸內切酶的DNA包含在載體中。
14.權利要求1至13中任一項的工程化RNA指導的核酸內切酶復合物，其中指導RNA的第一分子是化學合成的，并且指導RNA的第二分子是通過體外轉錄合成的。
15.權利要求1至13中任一項的工程化RNA指導的核酸內切酶復合物，其中指導RNA的第一和第二分子由可操作連接至啟動子控制序列用于真核表達的DNA編碼。
16.權利要求15的工程化RNA指導的核酸內切酶復合物，其中編碼指導RNA的DNA包含在載體中。
17.權利要求1至16中任一項的工程化RNA指導的核酸內切酶復合物，其中靶位點位于原間隔毗連基序(PAM)的上游。
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