[發明專利]一種逆轉錄轉座基因L1-FGGY及其作為肺鱗癌標志物的用途

有效

• 申請號: 201810572354.1
• 申請日: 2018-06-06
• 公開（公告）號: CN108796079B
• 公開（公告）日: 2021-07-27
• 發明（設計）人: 于津浦;劉芃芃;張蕊
• 申請（專利權）人: 天津醫科大學腫瘤醫院
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886;C12N15/54;A61K31/551;A61K31/536;A61P35/00
• 代理公司: 天津市宗欣專利商標代理有限公司 12103
• 代理人: 董光仁

本發明公開了一種逆轉錄轉座基因L1?FGGY及其作為肺鱗癌標志物的用途。所述逆轉錄轉座基因L1?FGGY的核酸序列為SEQ ID NO.1。所述逆轉錄轉座基因L1?FGGY的上游檢測引物核酸序列為SEQ ID NO.2；下游檢測引物核酸序列為SEQ ID NO.3。所述逆轉錄轉座抑制劑奈韋拉平或依法韋侖可以抑制逆轉錄轉座基因L1?FGGY的表達水平，用于治療肺鱗癌。本發明公開的L1?FGGY逆轉錄轉座基因可以作為一個新的腫瘤標志物，對L1?FGGY的檢測可以用以進行肺鱗癌的早期診斷、分子分型，以及預后評估，同時L1?FGGY還可能成為一個潛在的治療靶點，應用于肺鱗癌的臨床治療，具有廣闊的應用前景。

技術領域

本發明涉及DNA重組技術，更具體地是一種逆轉錄轉座基因L1-FGGY及其作為肺鱗癌標志物的用途。

背景技術

肺癌是最常見的惡性腫瘤，目前在全世界范圍內發病率及病死率均位居前列，5年生存率僅約15.6％，主要原因是約75％的患者在診斷時已是晚期肺癌，早期診斷的不足造成了肺癌患者的預后差。非小細胞肺癌(NSCLC)占肺癌的85％以上，主要包括肺腺癌、肺鱗癌和大細胞肺癌，其中肺鱗癌占NSCLC的30％左右。近年來，EGFR、ALK等腫瘤分子標志物的深入研究，大大促進了肺腺癌的分子診斷和靶向治療。但是肺鱗癌中卻缺乏有效的早期診斷和預后預測的分子標志物，這不僅影響肺鱗癌的早診早治，也在一定程度上導致了肺鱗癌的臨床療效差強人意。目前相對肺腺癌，肺鱗癌的治療手段非常少，只能依靠常規的放化療。因此，針對肺鱗癌，依托目前快速發展的高通量基因檢測和大數據分析技術，篩選可用于肺鱗癌的早期診斷、分子分型、預后評估和靶向治療的基因標志物，同時探索有效的治療方法及其適應癥，對于肺鱗癌的精準診療具有至關重要的意義。

腫瘤是由細胞中多種基因突變積累所引起的疾病。近年來，隨著測序技術的發展，多種基因變異形式，包括點突變、插入/缺失、拷貝數變異、基因重排均被發現可參與肺癌的發生和發展過程，其中多種罕見基因重排，比如ALK融合和ROS1融合，成為肺腺癌診治的關鍵靶點，但在肺鱗癌中卻鮮見這些融合基因標志物。融合基因，屬于一種染色體重排的現象，是指兩個或多個基因的編碼區首尾相連，位于同一套調控序列(包括啟動子、增強子、核糖體結合序列、終止子等)控制之下，構成的嵌合基因。雖然融合基因近年來得到越來越多的關注，但實際上融合基因并不是腫瘤中最常見的基因重排現象。本實驗室前期工作發現，在肺鱗癌中存在另一種高頻的染色體重排的現象，它發生重排的區域不是基因的編碼區，而是非編碼區，這種非編碼區的染色體重排被稱為逆轉錄轉座(retrotransposition)。逆轉錄轉座在人類基因組中廣泛發生，致使人類基因組中產生散在分布的重復序列，這些重復序列構成了人類大約一半的基因組DNA。有文獻證實逆轉錄轉座存在于多種腫瘤組織中，如結腸癌、前列腺癌、卵巢癌和肝癌，其發生頻率高，可能是一種潛在的腫瘤基因標志物。但由于逆轉錄轉座缺乏有效的篩選手段，因此針對其作為基因標志物的研究一直遲滯不前。近年來，隨著高通量基因檢測和生物信息分析技術的提高，多種不同形式的逆轉錄轉座子被鑒定出來，并逐漸闡明其與多種疾病的相關性。

逆轉錄轉座被定義為通過轉座元件將RNA中間體復制整合到基因組DNA的機制，主要包括3種類型：即長散布元件(LINE-1，也稱為L1)，短散布元件(SINE)和長末端重復(LTR)。其中LINE-1是目前人體內存在的唯一具有自主轉座活性的轉座子，約占人類基因組的17％。LINE-1通過RNA中間體自我復制，并插入整合到基因組中，從而導致遺傳的不穩定性，并影響附近基因的表達。1988年，科學家首次意識到逆轉錄轉座的病理作用，Kazazian等發現LINE-1序列的插入可導致A型血友病，目前已證實由LINE-1介導的遺傳疾病已經有超過100例的報道。研究顯示，LINE-1的轉座可以通過激活原癌基因或失活抑癌基因導致癌癥發生。在乳腺導管腺癌中發現，LINE-1的轉座能引起的MYC癌基因的重排和擴增，導致癌癥發生。在結腸癌中，LINE-1轉座插入APC抑癌基因的最后一個外顯子后使APC基因失活，最終導致癌癥發生。這兩個研究結果為LINE-1轉座影響目的基因的表達和功能，從而導致腫瘤發生提供了直接的證據。雖然，LINE-1的復制和轉座可導致包括腫瘤在內的基因疾病，但對于其對肺鱗癌發生發展的影響目前尚無報道。