[發明專利]一種顆粒性角膜營養不良II型核酸檢測試劑盒

在審

• 申請號: 201810571591.6
• 申請日: 2018-06-06
• 公開（公告）號: CN108642157A
• 公開（公告）日: 2018-10-12
• 發明（設計）人: 沈以新;姚魯帥;劉小曼
• 申請（專利權）人: 無錫正則精準醫學檢驗有限公司
• 主分類號: C12Q1/686
• 分類號: C12Q1/686
• 代理公司: 連云港聯創專利代理事務所(特殊普通合伙) 32330
• 代理人: 劉剛

本發明公開了一種顆粒性角膜營養不良II型核酸檢測試劑盒，包括引物GCD124?PF1、引物GCD124?PR1、內參引物M?26F、內參引物M?26R、探針GCD124?W1、探針GCD124?M1、內參探針M?01D，擴增預混液、探針引物預混液、和陰、陽性質控，其中本發明的試劑盒，本發明的試劑盒，可采用多個不同的熒光對多個不同的探針進行標記，能夠同時對GCD II型的野生型和突變型進行檢測；經過核酸提取和純化后的檢測過程不超過2小時。

技術領域

本發明涉及一種顆粒性角膜營養不良II型核酸檢測試劑盒。

背景技術

顆粒狀角膜營養不良(Granular corneal dystrophy,GCD)是一組以進行性角膜渾濁，最終導致嚴重的視力損害的少見的遺傳性、雙眼對稱性、具有組織病理學特征的原發性疾病，中國人群以GCD-II型最為常見。Avellino角膜營養不良(Avellino CornealDystrophy,ACD)為角膜營養不良的一種，即通常所稱的顆粒性角膜營養不良Ⅱ型(GCD-Ⅱ型)，其多于青少年期發病，雙眼角膜中央區出現進行性沉積性顆粒狀、桿狀或雪花狀渾濁，最終導致嚴重視力損害，早期診斷發現并治療，防止或延緩視力損害。

目前對引起GCD-II疾病的基因研究最多的是轉化生長因子β誘導蛋白基因(TGFβI)，并發現Avellino角膜營養不良疾病與TGFβI基因5q31區域上第4外顯子突變有關，突變類型為p.R124H(CGC>CAC)。臨床數據研究發現，TGFβI基因的p.R124H位點純合突變造成的角膜營養不良相比于相應的雜合子點突變造成的角膜營養不良，其發病時間更早、癥狀更加嚴重，而且行角膜成形術后復發時角膜渾濁的出現速度可能更快，程度更加嚴重，表明ACD疾病的發病可能存在突變劑量累積效應。

攜帶有Avellino角膜不良癥突變基因的患者，其角膜在受外傷或者受到紫外線、激光等的刺激后，會出現非正常蛋白質類物質沉積在角膜上，導致患者角膜混濁、視力嚴重下降，甚至失明。因此，攜帶有Avellino角膜不良遺傳突變基因的患者，是絕對禁止進行準分子(包括LASIK、LASEK或PRK等)、半飛秒、飛秒等激光屈光手術。因此，有針對地進行顆粒性角膜營養不良(GCD)II型核酸的檢測對激光屈光手術具有重要意義。

目前，顆粒性角膜營養不良(GCD)II型核酸檢測的方法不多，方法如PCR法、DNA芯片法等。其中，PCR方法較為成熟，具有快速、簡便、靈敏等特點。由于單重PCR通量不高的局限性，一般在進行PCR反應后還需要做進一步實驗才能鑒別GCD II型的野生型和突變型。DNA芯片法就是指在固相支持物上原位合成寡核苷酸或者直接將大量的DNA探針以顯微打印的方式有序地固化于支持物表面，然后與標記的樣品雜交，通過對雜交信號的檢測分析，即可獲得樣品的遺傳信息，但是，DNA芯片法步驟繁瑣，包括樣品中擴增DNA的步驟、使擴增的DNA與DNA芯片雜交的步驟、清洗雜交的DNA芯片的步驟等。

發明內容

本發明要解決的技術問題是克服現有技術中顆粒性角膜營養不良(GCD)II型核酸檢測方法較為繁瑣的缺陷，提供一種高通量的顆粒性角膜營養不良II型核酸檢測試劑盒。

為了解決上述技術問題，本發明提供了如下的技術方案：

一種顆粒性角膜營養不良II型核酸檢測試劑盒，包括引物GCD124-PF1、引物GCD124-PR1、探針GCD124-W1、探針GCD124-M1、內參引物M-26F、內參引物M-26R、內參探針M-01D；擴增預混液、探針引物預混液、和陰、陽性質控，其中

引物GCD124-PF1的序列5'-3'具體為：AGAGGCCATCCCTCCTTCT；

引物GCD124-PR1的序列5'-3'具體為：GTTGCTAGGGGCGAAGATG；

探針GCD124-W1的序列5'-3'具體為：VIC-CTCCGTGCGGTC-MGB；