[發明專利]一種多色熒光標記樣本的塑性包埋方法

在審

• 申請號: 201810562968.1
• 申請日: 2018-06-04
• 公開（公告）號: CN108827747A
• 公開（公告）日: 2018-11-16
• 發明（設計）人: 龔輝;李向寧;任淼;田嬌嬌
• 申請（專利權）人: 華中科技大學蘇州腦空間信息研究院
• 主分類號: G01N1/36
• 分類號: G01N1/36;G01N1/30
• 代理公司: 南京艾普利德知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 32297
• 代理人: 陸明耀

1.一種多色熒光標記樣本塑性包埋方法，其特征在于，包括：

將生物樣本進行預處理；

將預處理后的生物樣本依次放入0.5-0.7wt% DTT的梯度濃度的酒精溶液中進行滲透，每個濃度0.5-3小時，隨后在不同質量濃度的樹脂溶液中繼續滲透6-12小時，所述不同濃度的樹脂溶液包括0.1-0.2wt%的SBB和0.7-1wt%的DTT；

用樹脂滲透液對所述經梯度滲透后的生物樣本進行包埋、加熱后得到包埋的熒光標記樣本。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述對生物樣本進行預處理包括：

將生物樣本在多聚甲醛固定液中固定12-24小時；

將固定后的生物樣本在漂洗液中漂洗6-12小時；

將所述漂洗后的生物樣本依次放入冰水預冷卻的50%、70%和95%或100%乙醇溶液中進行梯度脫水，每次5分鐘到2小時。

3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，

所述不同濃度的樹脂溶液的質量濃度為40%~60%、60%~70%、70~90%和90%~100%。

4.根據權利要求3所述的方法，其特征在于，所述不同濃度的樹脂溶液的質量濃度分別為50%、70%、85%和100%。

5.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述梯度濃度酒精溶液的質量濃度分別為50%、70%、85%和100%。

6.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述用樹脂滲透液對所述經梯度滲透后的生物樣本進行包埋具體為：

將梯度滲透后的生物樣本放置于包埋模具中，隨后在模具中充滿樹脂滲透液。

7.根據權利要求5所述的方法，其特征在于，所述樹脂滲透液和樹脂溶液中的樹脂具體為GMA樹脂。

8.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，加熱后得到包埋的熒光標記樣本具體為：

將所述填充后的模具在35℃-40℃下加熱12到24小時。

9.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述樹脂溶液的溶劑為95%乙醇。

10.根據權利要求1~9任意一條權利要求所述的方法，其特征在于，所述生物樣本選自可發射熒光的動物組織。