[發明專利]一種基于熒光PCR法聯合檢測HIV-1型及HCV的試劑盒及其制備方法和檢測方法

有效

• 申請號: 201810562494.0
• 申請日: 2018-06-04
• 公開（公告）號: CN108588286B
• 公開（公告）日: 2022-03-04
• 發明（設計）人: 張鵬;樊彥;熊磊;李婷婷
• 申請（專利權）人: 張鵬;上海之江生物科技股份有限公司
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/686;C12N15/11
• 代理公司: 上海光華專利事務所(普通合伙) 31219
• 代理人: 李艷;許亦琳

本發明屬于生物技術檢測領域，具體涉及一種基于熒光PCR法聯合檢測HIV?1型及HCV的試劑盒及其制備方法和檢測方法。本發明應用多重PCR技術和熒光PCR技術，將兩者病毒的檢測整合在一個試劑盒中，可單管聯合檢測HIV?1型及HCV型病毒。具有快速、特異性、靈敏度高、成本相對低等優點。另外，與當前市場上僅有的少數的同時檢測兩種病毒的產品相比，這類產品的靈敏度往往只能達到1x10³IU/ml，且由于引物探針過多造成非特異性擴增，出現假陽性現象，影響特異性。而本發明的產品只需要選用2對引物及2條探針，靈敏度和特異性都明顯優于現有產品。

技術領域

本發明屬于生物技術檢測領域，具體涉及一種基于熒光PCR法聯合檢測HIV-1型及HCV的試劑盒及其制備方法和檢測方法。

背景技術

人類免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus,HIV)，即艾滋病(AIDS，獲得性免疫缺陷綜合征)病毒，是造成人類免疫系統缺陷的一種病毒。它是一種感染人類免疫系統細胞的慢病毒(lentivirus)，屬逆轉錄病毒的一種。HIV通過破壞人體的T淋巴細胞，進而阻斷細胞免疫和體液免疫過程，導致免疫系統癱瘓，從而致使各種疾病在人體內蔓延，最終導致艾滋病。由于HIV的變異極其迅速，難以生產特異性疫苗，至今無有效治療方法，對人類健康造成極大威脅。據WHO統計，自1987年WHO宣布HIV大流行以來，HIV感染已經導致了3900萬人死亡，目前為止HIV仍然是全球最大的公共衛生挑戰之一，因此如何及早發現HIV病毒感染者，防止其傳染給他人是艾滋病預防的一大重點方向。

目前對HIV的檢測方法主要是使用血清學方法，用酶聯免疫吸附實驗ELISA檢測病人血清中的HIV抗體進行初篩，再用免疫印跡實驗進行確認。但這類血清學檢測方法不適合用于抗體窗口期的感染者或是HIV陽性母親所生嬰兒的檢測。而核酸檢測方法，其檢測靶標直接針對HIV病毒，可有效補充血清學檢測窗口期檢測問題，因此在臨床上已將HIV核酸檢測作為HIV檢測的一種補充。

HIV根據血清學反應和核酸序列分為兩個型：HIV-1型和HIV-2型。HIV-1型具有全球流行性，世界上絕大部分艾滋病患者都是感染了HIV-l型；而HIV-2型的感染者只集中在少數幾個西非國家，其臨床癥狀輕于HIV-1感染者，與HIV-1感染者相比平均壽命較長。因此HIV的篩查重點是HIV-1型。

丙型肝炎由丙型肝炎病毒(HCV)感染所致，主要由血液/體液傳播。據世界衛生組織估計，全球有1.8億人感染HCV。在我國健康人群抗HCV陽性率為0.7％～3.1％，約3800萬人。由于病毒生物學特點和宿主免疫功能等多方面因素，機體免疫往往難以有效清除病毒，致使約50％～80％HCV感染者發展為慢性肝炎，其中20％～30％將發展成肝硬化。肝硬化患者中每年有1％～4％發展成為肝細胞癌癥。未來20年內與HCV感染相關的死亡率(肝衰竭及肝細胞癌導致的死亡)將繼續增加，對患者的健康和生命危害極大，已成為嚴重的社會和公共衛生問題。

據估計，在目前全球存活的4000萬HIV/AIDS患者中，約25％～33％的病例合并感染了HCV，在美國估計約有100萬的居民合并感染HIV與HCV兩種病毒。由于具有共同的傳播途徑，HIV與HCV合并感染的可能性很大，雖然異性傳播HCV的危險性很低，但是感染HIV之后HCV感染的幾率明顯提高，同時感染HIV也能夠增加同性傳播感染HCV的可能性，因此，在高危性行為人群中兩者合并感染的幾率很大。基于此，對于HIV和HCV的同時檢測需求也越來越顯得迫切。

發明內容

針對傳統檢測手段中所存在的問題，本發明的目的在于提供一種基于熒光PCR法聯合檢測HIV-1型及HCV的試劑盒及其制備方法和檢測方法，可用于單管同步檢測HIV-1型及HCV病毒。

為了實現上述目的，本發明采用如下技術方案：

本發明的第一方面，提供一種基于熒光PCR法聯合檢測HIV-1型及HCV的試劑盒，所述試劑盒中包括HIV-1檢測引物及探針、HCV檢測引物及探針。