[發明專利]用于鑒定赤水烏骨雞綠殼基因型的引物及其應用與使用方法在審
| 申請號： | 201810558176.7 | 申請日： | 2018-06-01 |
| 公開（公告）號： | CN108950006A | 公開（公告）日： | 2018-12-07 |
| 發明（設計）人： | 李輝;陳林;趙忠海;卜小雁;師新彩;楊華婷;李興才 | 申請（專利權）人： | 貴州大學 |
| 主分類號： | C12Q1/6888 | 分類號： | C12Q1/6888;C12Q1/686;C12N15/11 |
| 代理公司： | 貴陽中新專利商標事務所 52100 | 代理人： | 李亮;程新敏 |
| 地址： | 550025 貴州省貴*** | 國省代碼： | 貴州;52 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 引物 綠殼基因 基因型 基因 檢測擴增產物 多重PCR擴增 引物組合物 基因插入 綠殼蛋雞 設計合成 序列基因 遺傳標記 有效分子 對引物 殼蛋 應用 鑒別 觀察 | ||
1.一種用于鑒定赤水烏骨雞綠殼基因型的引物，其特征在于：包括2對共3條引物，包含1條上游引物F，1條下游引物R1，1條下游引物R2，上游引物F及下游引物R1為SLCO1B3基因EAV-HP序列插入引物,上游引物F與下游引物R2為SLCO1B3基因非插入序列引物，其中，上游引物F的引物序列為：5’GGCAGAGGGTTGATCCAAAGTA 3’，下游引物R1的引物序列為：5’GTGAGCAAGTCCCACCTATTCG 3’；下游引物R2的引物序列為:5’ATAGAGACAAAACCACAAAGGTAATG3’。
2.一種如權利要求1所述的引物在鑒別赤水烏骨雞綠殼基因型中的應用。
3.一種采用如權利要求1所述的引物來鑒別赤水烏骨雞綠殼基因型的方法，其特征在于：以待檢測雞的DNA基因組為模板，用引物進行PCR擴增，獲得PCR擴增產物，擴增產物進行瓊脂糖凝膠電泳，觀察電泳結果：若只得到884bp的條帶，則待檢測雞的SLCO1B3基因基因型為SL/SL綠殼純合型；若只得到732bp的條帶，則待檢測雞的SLCO1B3基因基因型為W/W非綠殼純合型；若得到884bp及732bp的兩條帶，則待檢測雞的SLCO1B3基因基因型為SL/W雜合型。
4.根據權利要求3所述的方法，其特征在于，所述PCR擴增反應條件為：94℃預變性5min，94℃變性30s，51.3℃退火40s，72℃延伸40s，35個循環，72℃終延伸10min，4℃保存。反應體系：上游引物F加2μL，下游引物R1加2μL；下游引物R2加2μl，2×PCR Taq mix為15μL，ddH2O加7μL，模板DNA加2μL，總反應為30μL體系。
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