[發明專利]包裹質粒DNA的陽離子脂質體復合物

有效

• 申請號: 201810555384.1
• 申請日: 2018-06-01
• 公開（公告）號: CN108653750B
• 公開（公告）日: 2022-04-22
• 發明（設計）人: 徐凱;羅徳倫;唐放;吳秀景;張耀藝
• 申請（專利權）人: 成都諾恩基因科技有限公司
• 主分類號: A61K48/00
• 分類號: A61K48/00;A61K9/127;A61K47/18;A61P35/00
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本發明公開了一種包裹質粒DNA的陽離子脂質體復合物，由陽離子脂質體及其包裹的質粒DNA組成，其中，所述陽離子脂質體由DOTAP與輔助脂質構成，所述質粒DNA為至少一種促進免疫反應的細胞因子的質粒載體；本發明應用免疫治療的原理，通過該脂質體的保護，使促免疫細胞因子和抗血管生成蛋白質的重組基因得以在血液里轉運，轉染腫瘤組織并表達；所述脂質體復合物兼有對腫瘤細胞組織造成缺血性壞死的功能，幫助機體對腫瘤抗原的識別。本發明的脂質體GM?csf復合物對早期EMT6乳腺癌細胞肺轉移癌治愈率達100%，對終晚期EMT6細胞肺轉移癌治愈率達到33%；利用GM?csf基因與重組VEGFR基因的脂質體復合物聯合應用，對終晚期EMT6細胞肺轉移癌治愈率提升到50%。

技術領域

本發明涉及腫瘤的基因治療技術領域，尤其涉及一種包裹質粒DNA的陽離子脂質體復合物及其制備方法。

背景技術

細胞分裂是機體發育和組織修復的正常過程。母細胞分裂成兩個相等的子細胞，這些子細胞可能進一步分化，裝配新的組織，或者取代老化的細胞或受到傷害的組織。當機體不再需要更多的細胞時，健康細胞通過接觸抑制、細胞因子、生長激素調控等手段，不再分裂。當健康細胞產生一系列基因突變，細胞分裂不再受到機體的調控，從而形成腫瘤細胞。腫瘤細胞是不斷分裂的細胞，生成瘤塊，并能通過血液向遠端的組織進行轉移。一般人們所說的“癌癥”習慣上泛指所有惡性腫瘤。惡性腫瘤具有細胞分化和增殖異常、生長失去控制、浸潤性和轉移性等生物學特征，其發生是一個不斷產生基因突變、受多因子影響的復雜過程。

根據中國國家腫瘤防治中心的統計，癌癥(惡性腫瘤)也是目前中國疾病導致死亡的頭號殺手。其中，又以肺癌的發病率最高。每年在中國有60萬患者死于肺癌，是十大癌癥死亡原因之首，且有逐年增加的趨勢。根據2010年美國癌癥協會的報告，癌癥是美國僅次于心臟病致死的主要原因。約31％的男性和26％的女性死于肺癌或支氣管癌。癌癥治療的常規手段包括手術，化療，放療。理論上，以手術完全移除腫瘤細胞，癌癥是可以被治愈的。對早期或較早期實體腫瘤來說，手術切除仍然是首選的治療方法。化療和放療均顯示出較大的副作用。在過去以傳統放化療和手術治療為主要治療手段的幾十年中，在改善長期結果和總體生存率方面取得的進展相對較小，特別是病人診斷出腫瘤時往往已是中晚期，患者5年生存率很低。概念上迫切需要新方法，即有針對性的藥物。2010年美國藥物和食品管理局(FDA)批準的第一個細胞免疫的腫瘤治療技術(Provenge)，拉開了腫瘤免疫治療的大幕。2014年至2017年有5個針對PD-1/PD-L1免疫檢測靶點的抗體藥物獲批上市。以CAR-T為代表的細胞免疫療法目前也已經有兩款上市，即諾華的Kymriah以及Kite公司的Yescarta。這些藥物或治療技術在腫瘤治療的長效性和延長患者生存率方面表現優異，并且副作用降低，PD-1/PD-L1抗體成為目前最好的抗癌藥，標志著在細胞、分子和機體各個層面的免疫治療正式成為腫瘤治療的主角，癌癥治療已進入免疫治療時代。腫瘤免疫治療未來的發展方向不僅是從根本上替代化療和放療，甚至可能會替代一部分手術，擁有廣闊的前景。

現代腫瘤免疫治療最重要發現是細胞毒性T淋巴細胞(Cytotoxic T Lymphocyte，CTL)能夠抑制腫瘤生長，而且是殺死腫瘤細胞的主要力量。無論是基于細胞、免疫抑制檢查點、增強免疫細胞因子和溶瘤病毒免疫治療的方案，都是圍繞CTL的擴增和調控設計的，主要依仗攜帶 CD8+、CD4+等表面抗原的T淋巴細胞對腫瘤細胞的識別和清除。T淋巴細胞表面抗體識別多肽抗原，包括腫瘤抗原(Neoantigen)。腫瘤抗原是專一地反映腫瘤細胞中基因突變產生的變異多肽，因此針對腫瘤抗原產生的T淋巴細胞具有非常高的腫瘤專一性，毒副作用小。

癌癥免疫周期包括幾個連續的步驟：癌細胞產生的腫瘤抗原被樹突細胞捕獲。樹突細胞將主要組織相容性復合物(MHC)分子中的捕獲的抗原呈遞給T淋巴細胞，引發和激活針對特異腫瘤抗原的CTL應答。在趨化因子梯度引導下，活化的CTL流入并浸潤腫瘤組織。通過T細胞受體 (TCR)和新抗原MHC復合物之間的相互作用，CTL利用表面抗體特異識別、結合并殺死具有可識別抗原的腫瘤細胞。