[發明專利]一種含脯氨酸的首尾環肽合成方法

有效

• 申請號: 201810554787.4
• 申請日: 2018-06-01
• 公開（公告）號: CN110551178B
• 公開（公告）日: 2020-07-21
• 發明（設計）人: 陳學明;朱艷婷;宓鵬程;陶安進;袁建成
• 申請（專利權）人: 深圳翰宇藥業股份有限公司
• 主分類號: C07K7/64
• 分類號: C07K7/64;C07K1/06;C07K1/04
• 代理公司: 北京市誠輝律師事務所 11430
• 代理人: 范盈

1.一種包含脯氨酸的首尾環肽合成方法，其包括以下步驟：1)選擇固相合成樹脂；

2)首先偶聯Fmoc-3-羧基-Pro-OAll，然后按照Fmoc固相合成策略，得到NH-(3-羧基-固相合成樹脂)-Pro-OAll然后依次偶聯肽序中的氨基酸殘基Fmoc-AA-OH得到NH₂-AAn-(3-羧基-固相合成樹脂)-Pro-OAll；

3)固相脫除保護基All，得到NH₂-AAn-(3-羧基-固相合成樹脂)-Pro-OH；

4)固相首尾環化：偶聯AAn上的氨基與Pro上的羧基；

5)裂解固相合成樹脂，制備中間體環肽粗肽；

6)將中間體環肽粗肽在脫羧劑的作用下脫除末端Pro的3位羧基，制備含脯氨酸的環肽。

2.根據權利要求1所述的包含脯氨酸的首尾環肽合成方法，步驟6)所述脫羧劑為硝酸銀和過硫酸鈉的混合物。

3.根據權利要求2所述的包含脯氨酸的首尾環肽合成方法，步驟6)所用溶劑為乙腈水溶液，反應溫度為0-100℃，中間體環肽粗肽與硝酸銀、過硫酸鈉物質的量比為1：0.02：2。

4.根據權利要求3所述的包含脯氨酸的首尾環肽合成方法，步驟6)反應溫度為30-70℃。

5.根據權利要求1所述的包含脯氨酸的首尾環肽合成方法，步驟2)中偶聯Fmoc-3-羧基-Pro-OAll的方法為以成酯鍵偶聯劑將Fmoc-3-羧基-Pro-OAll的3位羧基與固相合成樹脂縮合偶聯，其中所述的成酯鍵偶聯劑選自HOBt、DMAP一種或多種的組合物。

6.根據權利要求1所述的包含脯氨酸的首尾環肽合成方法，步驟2)中Fmoc固相合成策略偶聯氨基酸包括以下步驟：

2.1)脫除Fmoc，接著用溶劑洗滌樹脂，直至用檢測方法檢測到完全脫除Fmoc為止；

2.2)將合適量的待偶聯Fmoc-AA-OH和成酰胺鍵偶聯劑在溶劑中溶解并活化后，一起加入到固相反應柱中，直至用檢測方法檢測到反應終止為止；

2.3)重復2.1)和2.2)，其中脫除Fmoc的試劑為20％的哌啶/DMF溶液。

7.根據權利要求6所述的包含脯氨酸的首尾環肽合成方法，所述步驟2)中的成酰胺鍵偶聯劑為DIC和化合物A的組合物或DIA和化合物A和化合物B的組合物，其中化合物A為HOBt或HOAt，化合物B為PyBOP、PyAOP、HATU、HBTU或TBTU。

8.根據權利要求7所述的包含脯氨酸的首尾環肽合成方法，成酰胺鍵偶聯劑為DIC和化合物A的組合物。

9.根據權利要求1所述的包含脯氨酸的首尾環肽合成方法，步驟4)固相首尾環化所用試劑為DIC+A或者DIA+A+B，其中A為HOBt或HOAt，B為PyBOP、PyAOP、HATU、HBTU、TBTU其中一種或幾種的組合。

10.根據權利要求1所述的包含脯氨酸的首尾環肽合成方法，步驟5)所述裂解所用裂解液為TFA、H₂O、PhOMe、苯甲硫醚的混合物。

11.根據權利要求10所述的包含脯氨酸的首尾環肽合成方法，步驟5)所述裂解所用裂解液為TFA:H₂O:PhOMe:苯甲硫醚＝90:5:4:1。

12.根據權利要求1所述的包含脯氨酸的首尾環肽合成方法，還包括可選地步驟7)純化步驟，所述純化步驟可采用反相高壓液相色譜法。

13.根據權利要求12所述的包含脯氨酸的首尾環肽合成方法，所述反相高壓液相色譜法包括：以反相十八烷基硅烷為固定相，以體積比0.1％醋酸水溶液/乙腈為流動相，流動相中體積比0.1％醋酸水溶液和乙腈的比例為98:2至50:50，收集目的峰餾分，濃縮凍干。