[發(fā)明專利]帶有微陣列固定化pH梯度柱的等電聚焦電泳芯片及方法在審
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 201810554632.0 | 申請(qǐng)日： | 2018-06-01 |
| 公開(kāi)（公告）號(hào)： | CN108445069A | 公開(kāi)（公告）日： | 2018-08-24 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 曹成喜;李國(guó)慶;王宇興;李紅根;孔凡志;劉小平;張強(qiáng);肖華 | 申請(qǐng)（專利權(quán)）人： | 上海交通大學(xué) |
| 主分類號(hào)： | G01N27/447 | 分類號(hào)： | G01N27/447 |
| 代理公司： | 上海交達(dá)專利事務(wù)所 31201 | 代理人： | 王毓理;王錫麟 |
| 地址： | 200240 *** | 國(guó)省代碼： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 微陣列 支架 等電聚焦電泳 聚焦電泳 電極 芯片 固定化 微柱 聚焦 充分接觸 分離分析 透光窗口 顯微切割 依次設(shè)置 陣列排布 直接在線 電泳 毛細(xì)管 微電泳 支持膜 膠和 進(jìn)樣 上樣 條帶 通量 蛋白 樣本 回收 檢測(cè) | ||
一種帶有微陣列固定化pH梯度柱的等電聚焦電泳芯片及方法，包括：由上而下依次設(shè)置的微陣列支架、微電泳槽、電極以及微陣列透光窗口，其中：微陣列支架的底部設(shè)有陣列排布的若干個(gè)微陣列微柱對(duì)，每個(gè)微陣列微柱對(duì)的末端設(shè)有微型pH梯度柱。微型pH梯度柱包括：位于微陣列支架底部的微型pH梯度膠和微型支持膜，pH梯度膠朝下便于微陣列pH梯度柱樣本進(jìn)樣，微型pH梯度柱通過(guò)微陣列支架和自身重力與電極充分接觸以組成電泳回路。有效避免了傳統(tǒng)IPG聚焦電泳復(fù)雜的操作，提高了IEF分離分析上樣速度，加速了聚焦速度，尤其是能夠直接在線檢測(cè)。同時(shí)，與毛細(xì)管/芯片聚焦電泳技術(shù)相比，本發(fā)明的pH梯度柱具有穩(wěn)定性好、通量高、聚焦蛋白條帶可顯微切割回收等特殊優(yōu)點(diǎn)。
技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明涉及的是一種生物檢測(cè)領(lǐng)域的技術(shù)，具體是一種帶有微陣列固定化pH梯度柱(IPG)的等電聚焦電泳芯片及方法。
背景技術(shù)
等電聚焦電泳(isoelectric focusing,IEF)是在電場(chǎng)中產(chǎn)生連續(xù)pH梯度，上樣的蛋白質(zhì)依據(jù)其等電點(diǎn)(isoelectric point，pI)不同在IEF電場(chǎng)中實(shí)現(xiàn)聚焦分離分析。常見(jiàn)的為基于固定化pH梯度膠條(immobilized pH gradient，IPG strip)等電聚焦電泳，通過(guò)在70～240mm長(zhǎng)基片上通過(guò)化學(xué)鍵合固定化電解質(zhì)形成預(yù)制的pH梯度，進(jìn)而通過(guò)聚焦電泳實(shí)現(xiàn)蛋白多肽的分離分析。這種長(zhǎng)基片等電聚焦電泳技術(shù)具有穩(wěn)定性好分辨率高等優(yōu)點(diǎn)，但明顯存在以下弊端：手工蛋白樣本進(jìn)樣繁瑣(10多步)，上樣水化時(shí)間長(zhǎng)(大于10小時(shí))，聚焦速度慢(5-10小時(shí))，以及冗長(zhǎng)的蛋白固定染色成像分析(大于7小時(shí))等。
發(fā)明內(nèi)容
針對(duì)以上存在的問(wèn)題，本發(fā)明提出一種帶有微陣列固定化pH梯度柱的等電聚焦電泳芯片及方法，擯棄了傳統(tǒng)固定化pH梯度聚焦電泳和現(xiàn)有毛細(xì)管/芯片聚焦電泳的弊端，結(jié)合了二者的聚焦電泳技術(shù)優(yōu)點(diǎn)，不僅很好地解決了傳統(tǒng)固定化pH梯度聚焦電泳的四個(gè)弊端，而且較好地解決了上述毛細(xì)管/芯片聚焦技術(shù)的三個(gè)一直未得到解決的技術(shù)問(wèn)題：低通量，樣本難以回收，天然梯度引起的等電聚焦不穩(wěn)定。
本發(fā)明是通過(guò)以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的：
本發(fā)明涉及一種帶有微陣列固定化pH梯度柱的等電聚焦電泳芯片，包括：由上而下依次設(shè)置的微陣列支架、微電泳槽、電極絲以及微陣列透光窗口，其中：陣列排布的若干個(gè)微陣列微柱對(duì)，每個(gè)微陣列微柱對(duì)的末端設(shè)有微型pH梯度柱，微型pH梯度柱通過(guò)微陣列支架和自身重力與電極充分接觸以組成電泳回路。
所述的微型pH梯度柱包括：位于微陣列支架底部的微型pH梯度膠和微型支持膜，其中：pH梯度膠朝下便于微陣列pH梯度柱樣本進(jìn)樣。
所述的微型pH梯度柱具有正負(fù)極性，且其正負(fù)極極性與微陣列支架極性一致。
所述的微陣列透光窗口通過(guò)密封框架嵌合于微電泳槽底部，且微陣列透光窗口與微陣列pH梯度柱的排布方向一致。
所述的微陣列透光窗口包括透明板與微陣列遮光膜。
所述的電極包括：陽(yáng)極電極絲和陰極電極絲。
所述的陣列排布是指：由12～24根微型pH梯度柱組成單一陳列pH梯度柱單元，1～8個(gè)單一陳列pH梯度柱單元構(gòu)成微陣列pH梯度柱陣，可以實(shí)現(xiàn)12～192根微型pH梯度柱同時(shí)水化進(jìn)樣及進(jìn)行多達(dá)192種不同樣本測(cè)試。
本發(fā)明涉及一種基于上述芯片的電泳方法，直接用排槍移液器將不同樣本同時(shí)添加到不同微陣列pH梯度柱上進(jìn)行進(jìn)樣時(shí)，然后將微型pH梯度柱兩端連接陽(yáng)極電極絲和陰極電極絲，進(jìn)行聚焦電泳分離分析。
技術(shù)效果
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