[發明專利]一種氮高效融合基因SA及其應用

在審

• 申請號: 201810553441.2
• 申請日: 2018-06-01
• 公開（公告）號: CN108823214A
• 公開（公告）日: 2018-11-16
• 發明（設計）人: 王寧寧;劉生;王丹;夏銅梅;靳潔莉
• 申請（專利權）人: 南開大學
• 主分類號: C12N15/29
• 分類號: C12N15/29;C12N15/82;C12N15/66;A01H5/00;A01H6/54
• 代理公司: 天津耀達律師事務所 12223
• 代理人: 侯力

1.一種氮高效融合基因SA，其核酸序列選自：

(a)如序列SEQ ID NO.1所示的核酸序列；

(b)與(a)限定的核酸序列至少有85％同源性的核酸序列。

2.權利要求1所述融合基因SA的引物，其特征在于，設計用于SA融合基因的創制的引物4條，具體引物序列如SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4和SEQ ID NO.5所示的核酸序列。

3.構建權利要求1所述的融合基因SA的方法，其特征在于，所述融合基因是通過人工拼接的方法將一種“源”器官特異性啟動子與細胞自噬關鍵基因進行連接構建的融合基因，具體操作步驟如下：

(1)利用權利要求2所述引物SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3，以大豆基因組DNA為模板，用PCR方法擴增SA融合基因的“源”器官特異性啟動子部分，回收擴增產物并進行TA克隆；

(2)利用權利要求2所述引物SEQ ID NO.4和SEQ ID NO.5，以大豆cDNA為模板,用PCR方法擴增SA融合基因中的細胞自噬關鍵基因部分，回收擴增產物并進行TA克隆；

(3)分別用Hind III/Nco I、Nco I/BstP I雙酶切步驟(1)中含有融合基因中“源”器官特異性啟動子的TA克隆質粒和步驟(2)中含有融合基因中細胞自噬關鍵基因的TA克隆質粒，分別回收上述核酸片段；

(4)用Hind III/BstP I雙酶切pCAMBIA3301質粒，回收大的載體片段；

(5)混合步驟(3)中回收的“源”器官特異性啟動子片段、細胞自噬關鍵基因片段和步驟(4)回收的pCAMBIA3301載體片段，在連接酶催化下進行連接反應；

(6)將連接產物轉化大腸桿菌DH5α感受態細胞，通過抗性篩選獲得在pCAMBIA3301載體上的SA融合基因的構建。

4.一種權利要求1所述的氮高效融合基因SA的應用，其特征在于，用該融合基因構建植物雙元表達載體，進行植物轉化，從而獲得基因組中含有以上SEQ ID NO.1所述融合基因核酸序列的轉基因植株。

5.據權利要求4所述的應用，其特征在于，用權利要求4所述植物雙元表達載體轉化大豆，獲得了SA融合基因插入基因組的轉基因大豆，這些轉基因大豆“源”器官中自噬介導的營養物質再動員效率提高，對低氮和低營養脅迫的耐受性顯著增強；在低氮土壤中種植比非轉化對照生長更旺盛，莖圍增大，分枝數增多，單株產量提高。