[發明專利]一種利用蛋白芯片對囊胚質量判斷的方法

有效

• 申請號: 201810552757.X
• 申請日: 2018-05-31
• 公開（公告）號: CN108982867B
• 公開（公告）日: 2019-10-11
• 發明（設計）人: 施文浩
• 申請（專利權）人: 西北婦女兒童醫院
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/533;G01N33/58
• 代理公司: 北京中濟緯天專利代理有限公司 11429
• 代理人: 線飛祥

本發明公開了一種利用蛋白芯片對囊胚質量判斷的方法，包括步驟：一、在胚胎發育到囊胚階段時，將囊胚轉移；二、將培養液滴吸取至樣品管中，并在樣品管中加入蛋白酶抑制劑后制成待測樣品；三、將待測樣品加入到384孔板中，并在每個孔中加入點樣液后制成待點樣樣品；步驟四、將孔內的待點樣樣品點到芯片上，將芯片在濕盒中放置和烘箱中烘干；五、對烘干后的芯片進行蛋白抗體的孵育，制成蛋白芯片；六、對每張蛋白芯片進行熒光檢測，并將得到的每個囊胚的六種蛋白質的含量分別與這六種蛋白質的標準含量進行比較。本發明能無創的、客觀的、定量的評價囊胚發育情況，可用以篩選質量高、具備種植潛能的囊胚，幫助提高對囊胚質量篩選的準確性。

技術領域

本發明屬于囊胚發育情況評價技術領域，具體是涉及一種利用蛋白芯片對囊胚質量判斷的方法。

背景技術

據世界衛生組織統計，不育癥的人群發病率達10％～15％，且呈上升趨勢。目前，治療不孕癥最重要且高效的手段就是體外受精-胚胎移植(In vitro fertilization-Embryo transfer，IVF-ET)技術，即試管嬰兒。該技術是將人類精子及卵子在體外受精、胚胎體外培養、胚胎移植回子宮的一系列人工助孕技術。

在IVF-ET技術中，往往需要對每位患者的多個胚胎進行篩選，選擇出最具備種植發育潛能的胚胎進行移植，其中高質量的囊胚期胚胎(囊胚)具有較高的種植發育潛能。其次，為了提高IVF-ET成功率并降低多胎妊娠等并發癥，單囊胚移植日漸成為大勢所趨。因此，如何挑選出高質量的、具備種植發育潛能的囊胚已成為關鍵因素。

在胚胎發育過程中會從培養液中吸收營養物質以滿足細胞的生長和分化，同時也會向培養液中分泌代謝產物，因此，通過測定胚胎培養液中這些營養物質和代謝物的含量變化可以判斷胚胎的活力和發育潛能。胚胎分泌蛋白質的測定已是多年來胚胎篩查的方向，已發現人類胚胎會分泌可溶性人類白細胞抗原-G(sHLA-G)、載脂蛋白-1(Lipocalin-1)、血小板活性因子(PAF)、胰島素樣生長因子(IGF)、泛素(ubiquitin)等蛋白質。囊胚在著床前，也會分泌大量蛋白因子參與母胎分子對話和信號交換，以使兩者協調同步發育，并且識別子宮內膜，介導著床過程的完成。所以，通過對囊胚培養液中某些與囊胚質量特異相關的蛋白質進行含量檢測，可以對囊胚的質量、種植發育潛能進行評價。

目前，對胚胎的篩選仍停留在形態學觀察為主的階段。形態學評分是根據胚胎在不同發育時期的形態特征進行評價，主要分為原核期評分、卵裂期評分和囊胚期評分。形態學評分具有明顯的階段性，每個階段的評分標準不同，但評分指標均為目測判斷，主觀性強。

常規是在受精后胚胎培養至第5～6日(囊胚期)進行形態觀察，根據形態特征進行評分，然后選擇評分高的囊胚進行移植。盡管考慮到目前已知的所有形態學參數，但仍然無法確定哪些囊胚會著床發育。再者，囊胚是立體的、動態發展的，且細胞較多、細胞間隙不明顯，人眼通過顯微鏡觀察到的圖像會有偏差，加之不同人的主觀臆斷就會使偏差放大，所以往往不同人的評分結果不同，可能會對囊胚質量造成誤判。

近年來胚胎時差成像技術興起，通過結合胚胎分裂模式及分裂時間來評估胚胎質量，但其對臨床妊娠率的改善仍有爭議。所以，形態學評分篩查囊胚質量存在明顯不足，難以客觀定量，尚無準確、可靠、定量的篩選方法。

蛋白質是調節細胞生物學功能的關鍵因子，可以更加靈敏地反映胚胎的生理和病理狀態。建立篩選囊胚的蛋白質含量檢測芯片，可為IVF-ET中囊胚篩選提供客觀的、量化的檢測指標。為此，設計一種利用蛋白芯片對囊胚質量判斷的方法是很有必要的。

發明內容

本發明的目的在于克服上述現有技術中的不足，提供一種利用蛋白芯片對囊胚質量判斷的方法，其能無創的、客觀的、定量的評價囊胚發育情況，可用以篩選質量高、具備種植潛能的囊胚，幫助提高對囊胚質量篩選的準確性，其篩選準確度提高5％～10％。