[發明專利]磷酸化多肽抗原疫苗及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 201810551372.1
• 申請日: 2018-05-31
• 公開（公告）號: CN110548135B
• 公開（公告）日: 2023-06-06
• 發明（設計）人: 孔維;吳慧;孫瑤;郭永青
• 申請（專利權）人: 長春百克生物科技股份公司;吉林大學
• 主分類號: A61K39/00
• 分類號: A61K39/00;A61K39/385;A61P25/28
• 代理公司: 北京北翔知識產權代理有限公司 11285
• 代理人: 張廣育;馮沖

1.一種磷酸化多肽抗原疫苗，其包含來自人全長Tau蛋白的兩個多肽片段，其中所述兩個多肽片段來自人全長Tau蛋白的如下區域：人全長Tau蛋白的第194-266位氨基酸和人全長Tau蛋白的第392-408位氨基酸，并且含有磷酸化位點；其中所述兩個多肽片段通過肽鍵直接相連，連接后的氨基酸序列如SEQ?ID?NO.875或SEQ?ID?NO.1020所示，所述磷酸化位點為對應于人全長Tau蛋白的氨基酸序列的第202、205、396和404位發生磷酸化的氨基酸位點，即，P-Ser₂₀₂、P-Thr₂₀₅、P-Ser₃₉₆和P-Ser₄₀₄，其中人全長Tau蛋白的氨基酸序列如SEQ?IDNO.1332所示。

2.一種復合物疫苗，其由權利要求1的磷酸化多肽抗原疫苗與載體偶聯形成。

3.?權利要求2的復合物疫苗，其中所述載體選自人血清白蛋白、鑰孔藍蛋白素、細菌樣顆粒BLP、免疫球蛋白分子、甲狀腺球蛋白、卵清蛋白、牛血清白蛋白組分V、流感血球凝集素、PAN-DR結合肽、瘧疾環子孢子蛋白、乙型肝炎表面抗原HBSAg19-28、熱休克蛋白65、卡介苗、霍亂毒素、減毒的霍亂毒素變體、白喉毒素、諾如病毒衣殼P蛋白、重組鏈球菌C5a肽酶、化膿鏈球菌ORF1224、化膿鏈球菌ORF1664、化膿鏈球菌ORF2452、肺炎鏈球菌溶血素、減毒的肺炎鏈球菌溶血素變體、肺炎衣原體ORFT367、肺炎衣原體ORFT858、破傷風類毒素、HIVgp120T1、識別粘附基質分子的微生物表面組分、生長因子、激素和/或趨化因子。

4.權利要求3的復合物疫苗，其中所述載體為細菌樣顆粒BLP。

5.權利要求3的復合物疫苗，其中所述載體為諾如病毒衣殼P蛋白。

6.?權利要求5的復合物疫苗，其中所述諾如病毒衣殼P蛋白為PP-3C，其序列如SEQ?IDNO.1357所示，或PP-3K，其序列如SEQ?ID?NO.1359所示。

7.制備權利要求2的復合物疫苗的方法，所述方法包括如下步驟：

1）人工合成權利要求1的磷酸化多肽抗原疫苗；

2）制備待與所述磷酸化多肽抗原疫苗偶聯的載體；

3）將所述磷酸化多肽抗原疫苗與所述載體混合以進行偶聯反應；

4）分離純化3）中所得的偶聯體，由此獲得復合物疫苗。

8.權利要求7的方法，其中步驟2）中的載體為諾如病毒衣殼P蛋白，所述諾如病毒衣殼P蛋白為PP-3C或PP-3K，具體包括以下步驟：

i)?獲得含有編碼PP-3C或PP-3K蛋白的核酸的表達載體；

ii)?將所述表達載體轉入受體細胞；

iii)?表達所述PP-3C或PP-3K蛋白并在受體細胞中自組裝成重組P顆粒。

9.權利要求8的方法，還包括分離和純化步驟。

10.權利要求9的方法，其中使用離子交換色譜法和/或疏水層析色譜法進行純化。

11.權利要求7的方法，其中步驟3）采用PP-3C作為疫苗載體進行偶聯；或步驟3）采用PP-3K作為疫苗載體進行偶聯。

12.權利要求11的方法，其中采用PP-3C作為疫苗載體進行偶聯的緩沖體系為碳酸氫銨緩沖體系。

13.權利要求12的方法，其中碳酸氫銨緩沖體系的pH范圍為7.5-8.8。

14.權利要求13的方法，其中所述磷酸化多肽抗原疫苗與所述載體以10:1-100:1比例進行混合。