[發明專利]一種視網膜水腫動物模型的建立方法

有效

• 申請號: 201810547482.0
• 申請日: 2018-05-31
• 公開（公告）號: CN108902013B
• 公開（公告）日: 2022-02-15
• 發明（設計）人: 曲毅;程同杰;程英;李靳
• 申請（專利權）人: 山東大學齊魯醫院
• 主分類號: A01K67/02
• 分類號: A01K67/02;A61D7/00
• 代理公司: 濟南圣達知識產權代理有限公司 37221
• 代理人: 董潔

本發明公開了一種視網膜水腫動物模型的建立方法。使用577nm激光聯合孟加拉玫瑰紅的合理應用，阻塞鼠視網膜靜脈，形成視網膜水腫，使用無創的OCTA/OCT技術持續觀察模型眼視網膜及其水腫狀態。本發明致力于發明一種對模型動物創傷小，起效快、維持時間長且簡單易行的視網膜水腫動物模型的建立方法，用以很好的滿足相應的實驗要求。

技術領域

本發明涉及一種視網膜水腫動物模型的建立方法。

背景技術

黃斑水腫作為一種常見的眼部病變，多見于視網膜靜脈阻塞、糖尿病性視網膜病變、慢性葡萄膜炎、眼外傷、以及眼內手術后等?；颊咦杂X視力下降、視物變形，逐漸加重，嚴重影響患者生活質量。黃斑水腫的發病機制主要是由于上述原發疾病造成黃斑區毛細血管損傷發生滲漏造成水腫。目前有大量科研工作者致力于治療黃斑水腫的藥物研發。臨床前期實驗需要一種視網膜水腫動物模型，用于觀察所研發藥物的治療效果。該模型的建立要求簡單、低創、起效快、維持時間長。

根據文獻報道，可先建立黃斑水腫原發疾病的動物模型，隨疾病進展，產生視網膜水腫。糖尿病視網膜病變模型建立耗時久、花費大，產生視網膜水腫幾率不定；慢性葡萄膜炎模型多累及眼前段，易造成白內障等并發癥，視網膜水腫形成幾率不定且觀察困難；眼球外傷或眼內手術導致的視網膜水腫，具有一定的偶然性，非人為可控。以上幾種方案均無法提供快速起效、維持時間長的視網膜水腫動物模型。我們設想，可否阻塞視網膜靜脈，造成視網膜水腫模型。

視網膜靜脈阻塞動物模型多有報道。制備方法包括血管結扎法、透熱法、凝血酶靜脈滴注法、玻璃體腔內注入內皮素-1法、激光光凝法以及光化學反應法等。血管結扎法：早在1978年有學者選用獼猴，通過眶外側壁切開、燒灼結扎視網膜中央靜脈，造成血流中斷、遠端血流回流受阻。該方法操作復雜，破壞性較大，實驗動物受創嚴重，術后易并發感染，動物死亡率高，現已淘汰。透熱法，即玻璃體內電凝視網膜靜脈法：選用家豬為模型動物，將二極管探針于角鞏膜緣后3-4mm處插入玻璃體腔中，電凝上方視網膜靜脈，直至血流中斷、凝滯。此方法亦屬于侵入性手術，實驗動物創傷較大，術后易發生感染、眼壓升高等并發癥。凝血酶靜脈滴注法：選用家兔，通過玻璃體手術，將凝血酶直接滴注于視網膜靜脈管壁，6小時后可見血栓形成阻塞血管。該方法阻塞血管耗時長，且易隨血流運行造成其他部位血管的阻塞。玻璃體腔注入內皮素-1法：選用家兔，將內皮素-1注入玻璃體，造成視網膜血管收縮、管腔縮小直至完全閉塞。該方法中內皮素-1注入劑量不定，造成血管短暫性痙攣或是徹底閉塞不定，且對視網膜血管的作用為非選擇性，阻塞部位無法控制。激光光凝法：選用棕色挪威(BN)大鼠或SD大鼠，激光照射視網膜血管，激光產生的熱能使血管阻塞。該方法阻塞效果短暫，實驗動物多在術后3天左右出現血管再通。光化學反應法：選用BN大鼠或SD大鼠、無色素/有色素兔、小型豬等動物，采用激光聯合光敏劑，如氯化硫磺酸肽菁、孟加拉玫瑰紅，造成視網膜靜脈阻塞。該方法可造成視網膜出血、視網膜脫離等并發癥，術后3-5天即可見血管再通。有學者通過阻塞視網膜靜脈制備視網膜水腫模型：選用SD大鼠，靜脈注射光敏劑Erythrosin B聯合532nm激光持續照射視網膜8分鐘，術后可立即出現血管損傷及視網膜厚度增加，但術后5天視網膜厚度恢復至術前，14天發生視網膜明顯萎縮，無法提供長效視網膜水腫的動物模型，且長時間的激光照射增加對視網膜其他部位的損傷。

因此，需要建立一種視網膜水腫的動物模型，制備方法要求簡單、低創、起效快、維持時間長。

發明內容

針對現有技術存在的問題，我們通過研究發現，577nm激光照射聯合光敏劑孟加拉玫瑰紅的合理應用，可阻塞鼠視網膜靜脈造成視網膜水腫。該方法簡單、低創，術畢光學相干斷層掃描血流成像(OCTA)與光學相干斷層掃描(OCT)檢查即可見視網膜水腫，且可維持長達2周。