[發明專利]一種細胞分型捕獲芯片及方法

在審

• 申請號: 201810544015.2
• 申請日: 2018-05-30
• 公開（公告）號: CN108753571A
• 公開（公告）日: 2018-11-06
• 發明（設計）人: 宋彥齡;楊朝勇;施遠志;黃夢嬌
• 申請（專利權）人: 上海交通大學醫學院附屬仁濟醫院
• 主分類號: C12M1/00
• 分類號: C12M1/00;C12N5/09;C12N5/073
• 代理公司: 上海申匯專利代理有限公司 31001
• 代理人: 翁若瑩;王婧

1.一種細胞分型捕獲芯片，其特征在于，包括芯片基體，芯片基體設有進樣孔、出樣孔以及形成于進樣孔和出樣孔之間的流道，所述流道內設有微柱陣列，所述的微柱陣列在不同區域修飾標記有不同親和力特異性識別分子的納米結構，所述特異性識別分子包括抗體、核酸適體、多肽以及配體中的至少一種；所述修飾特異性識別分子的納米結構同靶標細胞具有不同的親和能力，因此能夠實現不同類型靶細胞在不同區域的識別和富集。

2.如權利要求1所述的細胞分型捕獲芯片，其特征在于，所述的微柱陣列按照確定性側向位移原理排列。

3.如權利要求1所述的細胞分型捕獲芯片，其特征在于，所述的納米結構包括納米球、納米棒以及納米線中的至少一種。

4.如權利要求1所述的細胞分型捕獲芯片，其特征在于，所述的修飾特異性識別分子的納米結構，利用了識別分子的多價結合，提高捕獲效率。

5.如權利要求1所述的細胞分型捕獲芯片，其特征在于，所述的修飾特異性識別分子的納米結構具有至少2種組成、大小、形狀、或修飾親和識別分子的密度，從而形成具有對靶細胞不同親和力的納米探針，根據不同類型靶細胞表達標志物的差異，實現不同類型靶細胞識別和富集。

6.如權利要求1所述的細胞分型捕獲芯片，其特征在于，所述的微柱陣列為三角形微柱陣列，旋轉三角形呈特定角度，使三角形微柱陣列的三面呈現梯度剪應力，增加靶標細胞和微陣列上識別分子的接觸時間，提高捕獲效率和純度，所述三角形為正三角形。

7.如權利要求1所述的細胞分型捕獲芯片，其特征在于，每個納米結構上修飾的特異性識別分子上識別分子數量為2-2000個，修飾有特異性識別分子的納米結構對靶細胞的親和力為1pM-500nM，具有不同識別分子個數的納米結構可對不同標志物表達量的靶細胞進行分型識別及富集。

8.一種分型捕獲靶細胞的方法，其特征在于，包括如下步驟：

步驟1：制作權利要求1-7中任一項所述的細胞分型捕獲芯片；所述的細胞分型捕獲芯片的不同區域的微柱陣列表面修飾標記有不同靶標親和力的特異性識別分子的納米結構，實現不同細胞或者不同類型細胞的分型捕獲；

步驟2：調控微柱陣列的臨界直徑0-50μm、流速0-10mL/h；

步驟3：將含有靶細胞的樣品通過進樣孔注入細胞分型捕獲芯片，緩沖溶液通過另兩個進樣孔注入；細胞進入微柱陣列，靶細胞被捕獲；

步驟4：通過蛋白酶、EDTA水解細胞膜蛋白或核酸酶水解核酸適體或其他能破壞識別分子同納米結構結合的分子對捕獲的靶細胞進行釋放；

步驟5：對釋放后的靶細胞進行下游活性、培養、增殖、藥物篩選、培養、基因、蛋白以及代謝分析中的至少一種；或對釋放后的靶細胞進行基于另一標志物的分型識別捕獲，實現細胞的多維分型捕獲。

9.如權利要求8所述的分型捕獲靶細胞的方法，其特征在于，所述的靶細胞為腫瘤細胞、胎兒細胞以及致病菌中的至少一種。

10.如權利要求8所述的分型捕獲靶細胞的方法，其特征在于，所述的其他能破壞識別分子同納米結構結合的分子為帶有巰基的小分子以及多肽中的至少一種。