[發明專利]一種鵝掌楸林分后代樹種類型的鑒定方法

有效

• 申請號: 201810543424.0
• 申請日: 2018-05-29
• 公開（公告）號: CN108660250B
• 公開（公告）日: 2020-01-10
• 發明（設計）人: 陳金慧;龍曉飛;肖保榮;章文鑫;王宇浩;王鵬凱;施季森;胡凌峰;楊立明
• 申請（專利權）人: 南京林業大學
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12Q1/686
• 代理公司: 32274 南京申云知識產權代理事務所(普通合伙)
• 代理人: 邱興天

本發明公開了一種鵝掌楸林分后代樹種類型的鑒定方法及其專用試劑盒，該方法包括：1)提取后代樹種的葉片DNA；2)進行SSR?PCR檢測；3)后代樹種判定，電泳能特異性擴增出112bp的產物為中國鵝掌楸，能特異性擴增出124bp的產物為北美鵝掌楸，能特異性擴增出112bp和124bp 2種產物為雜交鵝掌楸。本發明的鵝掌楸林分后代樹種類型的鑒定方法，具有重復性與穩定性好等優點，既可對鵝掌楸天然林以及人工林后代樹種類型，進行有效鑒定，尤其是處于幼苗階段的鵝掌楸天然林人工林的后代，又可對種子園的種子是中國種、北美種、還是雜交種進行鑒定，速度快，效率高，結果準確，具有很好的實用性。

技術領域

本發明屬于樹種鑒定技術領域，具體涉及一種鵝掌楸林分后代樹種類型的鑒定方法。

背景技術

鵝掌楸屬(Liriodendron L.)是木蘭科(Magnoliaceae)植物，屬古老屬種之一。現包括三個種：中國鵝掌楸(Liriodendron chinense(Hemsl.)Sarg.)，北美鵝掌楸(Liriodendron tulipifera Linn.)以及兩者雜交種雜交鵝掌楸Liriodendron chinense×tulipifera。鵝掌楸屬植物是研究植物進化歷史進程的理想材料，具有重要的研究意義。

中國鵝掌楸樹干通直，可用作木材，馬褂形三裂葉片，具有較高的觀賞價值屬于國家二級珍稀瀕危保護植物。北美鵝掌楸材質優良，淡黃褐色，紋理密致美觀，切削性光滑，易施工，為船艙，火車內部裝修及室內高級家具用材，為美國重要用材樹種之一。雜交鵝掌楸具雜交優勢，抗逆性與生長特性均明顯優于中國種和美國種。但由于鵝掌楸屬植物自然授粉不良，發芽率低，現在得到雜交種的方式主要為人工授粉或嫁接繁殖?，F有的方法都相對來說比較繁雜，人們一直在尋找更加方便有效的方法。

傳統的雜交鵝掌楸鑒定主要依據其與兩親本種在形態特征(劉玉新等， 2014)、木材解剖(王豐等，2014)和同工酶酶譜(丁小飛等，2009)等方面的差異。但形態特征在苗期差異并不明顯且易受環境條件影響，解剖方法在苗期也不易實現，同工酶標記受基因表達限制也會影響使用，因此，現有的品種鑒定方法，并不能完全滿足使用需求。

發明內容

發明目的：針對現有技術中存在的不足，本發明的目的是提供一種鵝掌楸林分后代樹種類型的鑒定方法，滿足對鵝掌楸天然林和人工林后代樹種類型的鑒定使用需求，尤其是幼苗階段的鵝掌楸天然林以及人工林的后代。

技術方案：為了實現上述發明目的，本發明采用的技術方案為：

一種鵝掌楸林分后代樹種類型的鑒定方法，包括以下步驟：

1)提取后代樹種的葉片DNA；

2)進行PCR檢測；

3)后代樹種判定，電泳能特異性擴增出112bp的產物為中國鵝掌楸，能特異性擴增出124bp的產物為北美鵝掌楸，能特異性擴增出112bp和124bp 2種產物為雜交鵝掌楸。

步驟1)中，葉片為剛展開的嫩葉，液氮處理后放置-80℃備用。

步驟1)中，DNA提取采用CTAB法進行。

步驟2)中，PCR擴增的10μL體系為：75ng基因組DNA，1.0μL 10×PCR Buffer,1.2μL2.5mM/L MgCl，0.2μL 10mM/L dNTP,0.5μL 10μM/L左端引物119F， 0.5μL 10μM/L右端引物119R和0.5個單位Taq酶，ddH₂O補足10μL。

步驟2)中，PCR擴增所使用的引物序列如下：

119F:TACCATCCGTTAGTGCTTCCGCTCCTG；

119R:CTTAGAATCGGGCATTCCACGCATCCA。