[發明專利]一種海洋來源單甘酯脂肪酶及其晶體結構和制備方法有效
| 申請號： | 201810540961.X | 申請日： | 2018-05-30 |
| 公開（公告）號： | CN108690838B | 公開（公告）日： | 2021-09-21 |
| 發明（設計）人： | 藍東明;袁紅;王永華;唐薇;楊博 | 申請（專利權）人： | 華南理工大學 |
| 主分類號： | C12N9/20 | 分類號： | C12N9/20;C12N15/70 |
| 代理公司： | 廣州市華學知識產權代理有限公司 44245 | 代理人： | 宮愛鵬 |
| 地址： | 510640 廣*** | 國省代碼： | 廣東;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 海洋 來源 單甘酯 脂肪酶 及其 晶體結構 制備 方法 | ||
【權利要求書】：
1.一種海洋來源單甘酯脂肪酶的晶體的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：
將海洋來源單甘酯脂肪酶的基因序列連接至pET-30a(+)質粒中，將表達載體轉入宿主菌BL21(DE3)中表達、純化獲得純蛋白；所述海洋來源單甘酯脂肪酶的氨基酸序列如SEQ IDNO.1所示；
將純蛋白濃縮為12mg/mL的蛋白水溶液，將蛋白溶液與池液混合，采取坐滴法對結晶條件進行高通量篩選；對結晶條件進行優化，得到了滿足結構解析的晶體；結晶條件為：所述池液含有0.2M硫酸銨、0.1M嗎啉乙磺酸pH 6.5～7.0和20％～30％w/v聚乙二醇單甲醚5000。
2.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述池液含有0.2M硫酸銨、0.1M嗎啉乙磺酸pH 6.6和28％w/v聚乙二醇單甲醚5000。
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