[發(fā)明專利]抗幽門螺旋桿菌蛋白的單克隆抗體及其細(xì)胞株、制備方法和應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810539840.3
• 申請(qǐng)日: 2018-05-30
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN108659125B
• 公開(kāi)（公告）日: 2021-06-04
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 楊清海;陳惠玲;高惠然;李婷;王小亞
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 福州邁新生物技術(shù)開(kāi)發(fā)有限公司
• 主分類號(hào): C07K16/12
• 分類號(hào): C07K16/12;C12N15/13;C12N5/20;G01N33/577;G01N33/569
• 代理公司: 福州市景弘專利代理事務(wù)所(普通合伙) 35219
• 代理人: 林祥翔;黃以琳

本發(fā)明提供了一種幽門螺旋桿菌抗體及其分泌細(xì)胞株、制備方法和用途。本發(fā)明以培養(yǎng)的幽門螺旋桿菌菌體蛋白的超聲上清部分為免疫原免疫小鼠，經(jīng)篩選后獲得了可特異結(jié)合幽門螺旋桿菌蛋白的抗體15A5，該抗體為IgG2a亞型。該抗體可檢測(cè)組織或血清中的感染的幽門螺旋桿菌。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物醫(yī)學(xué)工程領(lǐng)域，特別涉及一種抗幽門螺旋桿菌蛋白單克隆抗體及其細(xì)胞株、制備方法和應(yīng)用。

背景技術(shù)

幽門螺旋桿菌是一種革蘭氏陰性桿菌，螺旋形、微需氧、Marshall等于1983年首次從胃粘膜組織中分離到幽門螺桿菌(Helicobacter pylori，簡(jiǎn)稱Hp)，并報(bào)道和B型胃炎及消化性潰瘍密切相關(guān)。世界衛(wèi)生組織1994年起就將感染幽門螺旋桿菌劃定為第一類的致癌風(fēng)險(xiǎn)。世界有過(guò)半人口受到過(guò)幽門螺桿菌的感染，幽門螺桿菌寄生在胃黏膜組織中，感染首先引起慢性胃炎，并導(dǎo)致胃潰瘍和胃萎縮，或可發(fā)展為胃癌，幽門螺桿菌感染與胃癌死亡率的高低呈現(xiàn)平行關(guān)系。此外，從病因?qū)W角度講，它與胃潰瘍、十二指腸潰瘍、胃腺癌和原發(fā)B細(xì)胞淋巴瘤有關(guān)。

對(duì)于HP的檢測(cè)，最常見(jiàn)的方法包括碳13尿素呼氣試驗(yàn)、胃鏡結(jié)合組織病理檢查以及幽門螺旋桿菌抗體檢查。PCR方法也是快速準(zhǔn)確檢測(cè)幽門螺旋桿菌DNA的有效方法，免疫學(xué)檢測(cè)方法則包括測(cè)定血清中的抗體、補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)、凝集試驗(yàn)、被動(dòng)血凝測(cè)定、免疫印跡技術(shù)和酶聯(lián)合吸附測(cè)定(ELISA)以及免疫組織化學(xué)法等。無(wú)論采用何種免疫學(xué)檢測(cè)方法，對(duì)需要特異、敏感的檢測(cè)抗體。針對(duì)不同的用途，抗體的制備策略也有不同，即便是對(duì)于免疫檢測(cè)的用途，因檢測(cè)樣本類型不同、目標(biāo)蛋白在檢樣的狀態(tài)不同以及檢樣的基質(zhì)不同而引起的干擾類型不同，在抗原設(shè)計(jì)和選擇過(guò)程和抗體的篩選過(guò)程中都需要充分考慮。

常見(jiàn)的免疫原制備方法包括直接提取或純化包含目的蛋白的生物樣本(如組織裂解液、細(xì)胞裂解液、提取自天然組織活細(xì)胞的純化蛋白)，重組表達(dá)的抗原蛋白或其片段、化學(xué)合成的抗原肽等。針對(duì)Hp的菌體抗原制備方法主要包括目前國(guó)內(nèi)外報(bào)道不多。整菌抗原、超聲粉碎抗原或酸提取抗原。免疫檢測(cè)方法，以類似的方法，

利用全菌或簡(jiǎn)單分離的菌體蛋白制備幽門螺旋桿菌的抗體簡(jiǎn)單易行。李妍等用培養(yǎng)的幽門螺旋桿菌超聲后用上清和沉淀分別免疫BALB/c小鼠，獲得針對(duì)Lpp20、HspA、CagA、ureaseA、UreaseB及catalase的抗體共34株，利用這些抗體進(jìn)行了ELISA檢測(cè)，無(wú)免疫組化檢測(cè)和抗體對(duì)比。(抗幽門螺桿菌單克隆抗體的制備與鑒定，李妍，寧云山，洪燕華，劉宜楚，羅軍，龍敏，董文其，李明，南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2006,26(4)：425-427)，馬健也采用這類用全菌免疫，重組蛋白篩選的方法獲得了抗尿素酶B和熱休克蛋白Hsp60抗體，建立的夾心ELISA方法可以檢出25ng/ml的菌體蛋白。將全菌免疫小鼠獲得抗體直接標(biāo)記HRP檢測(cè)抗體(馬健，幽門螺桿菌單克隆抗體的制備及其在免疫檢測(cè)中的應(yīng)用，華南理工大學(xué)碩士學(xué)位論文，2014；馬健，倪超，王海鷹，寧正祥.幽門螺旋桿菌單克隆抗體制備及其檢測(cè)應(yīng)用.現(xiàn)代食品科技.2015,31(4):228-233.)其他利用全菌免疫的研究也有報(bào)道(劉志國(guó)等主編，中國(guó)幽門螺旋桿菌研究，科學(xué)技術(shù)文獻(xiàn)出版社，1997年出版，臨床篇1.2抗幽門螺桿菌單克隆抗體的制備和臨床應(yīng)用)。除兔多抗外，在獸藥研究中，雞IgY也是一類常用的抗體，聶作明等利用菌體蛋白和尿素酶B作為混合抗原免疫母雞，獲得了具有ELISA和免疫印跡檢測(cè)能力的IgY抗體(聶作明，楊嚴(yán)俊，徐榕榕，盛劍俊.抗幽門螺桿菌卵黃抗體的制備及其效價(jià)的評(píng)定.食品科學(xué),2005,26(4):232-237)，以開(kāi)發(fā)治療性Hp抗體為目標(biāo)，祝捷等用全菌和部分重組蛋白免疫產(chǎn)蛋母雞制得了具備抑菌效果的IgY抗體(祝捷，楊靖，周永君，潘興，楊廷敏等，特異性抗幽門螺桿菌卵黃抗體的制備及其抗菌作用研究.中國(guó)臨床微生物學(xué)大會(huì)暨微生物學(xué)與免疫學(xué)論壇,2013)，該抗體為禽源性抗體，暫時(shí)只可用于體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)。