[發明專利]一種免疫原組合物、其制備方法及其用途

有效

• 申請號: 201810538359.2
• 申請日: 2018-05-30
• 公開（公告）號: CN108752480B
• 公開（公告）日: 2022-03-29
• 發明（設計）人: 易維京;趙忠顥;李伯宏
• 申請（專利權）人: 中元匯吉生物技術股份有限公司
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C07K16/26;C07K16/18
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明提供了一種免疫原組合物，它包括如下組分：多肽與載體的偶聯物和所述的多肽，還提供了制備這種免疫原組合物的方法，包括如下步驟：將多肽與載體的偶聯物和所述的多肽按照質量比為：1:5?5:1混合后，質量比優選為1:1，加入生理鹽水將免疫原組合物的混合物稀釋到2倍最終濃度，得稀釋混合液，再加入與稀釋混合液等體積的所述的免疫佐劑稀釋至最終濃度，制備得到免疫原組合物；本發明還提供了采用這種免疫原組合物得到的單克隆抗體，最后得出，使用本發明中的免疫原組合物對動物進行免疫，免疫后的動物的血清效價得到了顯著的提高，大大的增加了單克隆抗體中雜交瘤細胞的陽性率，減少了人力以及物力資源的浪費。

技術領域

本發明屬于動物免疫領域，具體涉及制備單克隆抗體領域。

背景技術

雜交瘤技術自1975年建立以來，在現代醫學檢驗，治療等領域發揮了極為重要的作用。該技術是通過在體外把小鼠骨髓瘤細胞和漿細胞進行融合，篩選出分泌特定抗體的雜交瘤細胞，該細胞同時具有骨髓瘤細胞的永生性和漿細胞持續分泌特定抗體的能力，能在體外進行培養并生產抗體。盡管多年來雜交瘤制備技術不斷發展，但傳統的單克隆抗體制備過程仍舊繁瑣。融合后的雜交瘤細胞篩選通量較大，每塊96孔板對應取細胞上清進行ELISA篩查，再進行細胞的多輪克隆化和擴大培養。工作量的多少在很大程度上由產生陽性雜交瘤的多少決定，而陽性雜交瘤的產生依賴于分泌特異性抗體的漿細胞的多少。若前期篩查過程陽性雜交瘤細胞過少，會造成以下幾點影響：①為了選出更多的陽性雜交瘤，需要增加更多的鋪板板數及融合次數，導致浪費過多的培養耗材及試劑，特別是胎牛血清等高成本試劑；②更多的鋪板板數和融合次數以及冗長的ELISA篩查過程導致更多的人力物力消耗；③拖長單克隆抗體的制備周期；所以增加漿細胞的產生就顯得尤為重要，但是傳統的免疫方式均采用佐劑與抗原混合后進行小鼠免疫，促進淋巴細胞的活化，募集及相互接觸，達到增強免疫效果，提高機體免疫應答的抗體滴度，常用的佐劑有弗氏佐劑，RIBI 佐劑，氫氧化鋁佐劑等，但在實際應用中發現，傳統的免疫方式中采用的免疫原并不能滿足所有抗原的免疫及單克隆抗體的制備，所以開發一種新的免疫原來提高抗體的滴度就顯得尤為重要。

發明內容

為了解決上述問題，本發明提供了一種免疫原組合物，所述的組合物包含如下組分：多肽與載體結合所形成的偶聯物和所述的多肽。

進一步的，所述的多肽與載體結合所形成的偶聯物和所述的多肽的質量比為：1:5-5:1。

進一步的，所述的多肽與載體結合所形成的偶聯物和所述的多肽的質量比為1:1。

進一步的，所述的載體為蛋白質、多肽聚合物和大分子聚合物中的一種。

進一步的，所述的載體為蛋白質。

進一步的，所述的免疫原組合物還包括溶劑與免疫佐劑，所述免疫佐劑的體積等于所述偶聯物、所述多肽以及所述溶劑這三種物質體積之和。

進一步的，所述溶劑為生理鹽水。

本發明還提供了一種制備上訴免疫原組合物的方法，其方法如下：將多肽與載體結合所形成的偶聯物和所述的多肽按照質量比為：1:5-5:1混合后，質量比優選為1:1，加入生理鹽水將免疫原組合物的混合物稀釋到2倍最終濃度，得稀釋混合液，再加入與稀釋混合液等體積的所述的免疫佐劑稀釋至最終濃度，制備得到免疫原組合物。

本發明還提供了采用所述免疫原組合物對動物進行免疫的方法，這種方法中包括了向動物注射所述免疫原組合物這一步驟。

本發明還提供了所述免疫原組合物在制備單克隆抗體中的用途。

進一步的，所述的單克隆抗體為抗NT-proBNP單克隆抗體。

進一步的，得到所述抗NT-ptoBNP單克隆抗體，采用的免疫原組合物為NT-proBNP-肽和NT-proBNP-肽與載體結合所形成的偶聯物。