[發(fā)明專利]生殖道病原體核酸檢測(cè)引物、探針、試劑盒及檢測(cè)方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810536557.5
• 申請(qǐng)日: 2018-05-30
• 公開（公告）號(hào): CN108660254B
• 公開（公告）日: 2023-07-28
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 尹華立;裘惠良;鄭銀娜
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 杭州千基生物科技有限公司;杭州美聯(lián)醫(yī)學(xué)股份有限公司
• 主分類號(hào): C12Q1/70
• 分類號(hào): C12Q1/70;C12Q1/689;C12Q1/686;C12Q1/04;C12N15/11
• 代理公司: 深圳市博銳專利事務(wù)所 44275
• 代理人: 林棟

本發(fā)明涉及生殖道病原體核酸檢測(cè)引物、探針、試劑盒及檢測(cè)方法，本發(fā)明的生殖道病原體核酸檢測(cè)引物，包括：檢測(cè)生殖道病原體的引物，其核苷酸序列如SEQ?ID?No.1?6或SEQ?ID?No.7?12所示；檢測(cè)HPV分型的引物，其核苷酸序列如SEQ?ID?No.13?14或SEQ?ID?No.15?16所示。本發(fā)明的生殖道病原體核酸檢測(cè)試劑盒，基于量子點(diǎn)和PCR技術(shù)，可實(shí)現(xiàn)14種生殖道病原體和18種HPV基因分型的同時(shí)檢測(cè)，具有操作簡(jiǎn)單、價(jià)格低廉，可高效、快速、準(zhǔn)確地進(jìn)行32種病原體的檢測(cè)的優(yōu)點(diǎn)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及核酸檢測(cè)技術(shù)，特別涉及一種生殖道病原體核酸檢測(cè)引物、探針、試劑盒及檢測(cè)方法。

背景技術(shù)

量子點(diǎn)(Quantum?dot，QD)又稱半導(dǎo)體納米晶，呈近似球形，其三維尺寸在2-10nm范圍內(nèi)，具有明顯的量子效應(yīng)。量子點(diǎn)一般由II-VI族元素(如CdS、CdSe、CdTe、ZnSe、ZnS等)或III-V族元素(無(wú)鎘量子點(diǎn)，如InP、InAs等)等半導(dǎo)體材料構(gòu)成，也可由兩種或兩種以上的半導(dǎo)體材料構(gòu)成核/殼結(jié)構(gòu)(如常見的CdSe/ZnS核/殼結(jié)構(gòu)量子點(diǎn)等)。量子點(diǎn)的物理、光學(xué)、電學(xué)特性遠(yuǎn)優(yōu)于現(xiàn)有有機(jī)熒光染料，具有靈敏度高、穩(wěn)定性好、貨架期長(zhǎng)等優(yōu)勢(shì)，是新一代熒光標(biāo)記探針的最佳選擇。

量子點(diǎn)作為標(biāo)記探針尤其適用于高靈敏度、多指標(biāo)同時(shí)檢測(cè)等應(yīng)用領(lǐng)域，其優(yōu)勢(shì)如下：

1)量子熒光效率高，摩爾消光度系數(shù)大，其熒光強(qiáng)度比現(xiàn)有最強(qiáng)的有機(jī)熒光材料光強(qiáng)強(qiáng)20倍以上，適用于高靈敏度檢測(cè)，結(jié)合高分辨熒光顯微鏡可實(shí)現(xiàn)單量子點(diǎn)示蹤；

2)具有很好的光穩(wěn)定性，耐光漂白，適用于長(zhǎng)時(shí)間穩(wěn)定激發(fā)動(dòng)態(tài)觀察以及結(jié)果存檔；

3)熒光壽命長(zhǎng)，有機(jī)熒光染料或生物樣本背景熒光壽命一般僅為1-10納秒，而量子點(diǎn)的熒光壽命可持續(xù)10-100納秒，通過(guò)時(shí)間分辨特性，可降低背景干擾，提高靈敏度；

4)發(fā)射波長(zhǎng)因組成成分和粒徑大小而異，易于制備經(jīng)表面修飾后特性相似但發(fā)射波長(zhǎng)不同的量子點(diǎn)；

5)寬泛且連續(xù)的吸收光譜，實(shí)現(xiàn)單一光源多色激發(fā)；

6)發(fā)射光譜窄而對(duì)稱，可減少多色激發(fā)過(guò)程中不同量子點(diǎn)之間的干擾；

7)量子點(diǎn)具有較大的斯托克斯位移，易與斯托克斯位移較小的有機(jī)熒光染料和背景熒光相區(qū)分，可通過(guò)調(diào)整激發(fā)光波長(zhǎng)或使用濾光片，消除背景，提高靈敏度。

8)表面修飾后具有更好的生物相容性，與多種生物分子偶聯(lián)，無(wú)非特異吸附。

量子點(diǎn)材料在20世紀(jì)80年代分別由Alexey?I.Ekimov在玻璃基質(zhì)中，以及LouisE.Brus在膠體溶液中合成，隨后量子點(diǎn)表面配基化學(xué)修飾技術(shù)逐步完善。由于量子點(diǎn)相對(duì)于傳統(tǒng)熒光染料具有諸多優(yōu)點(diǎn)，在1998年Alivisatos和Nie將量子點(diǎn)應(yīng)用于生物分子標(biāo)記，使用生物活性分子如抗體或抗原等連接在量子點(diǎn)表面修配體的活性基團(tuán)上，實(shí)現(xiàn)了量子點(diǎn)生物熒光染色，開創(chuàng)了量子點(diǎn)生物標(biāo)記材料的應(yīng)用研究。

陰道炎是非常常見的一種婦科疾病，居?jì)D女生殖道感染疾病之首。陰道炎的發(fā)生、發(fā)展是一個(gè)多種因素共同作用的結(jié)果，生殖道的病原體感染與陰道炎的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)，生殖道病原體復(fù)雜多樣，包括細(xì)菌、霉菌、滴蟲、支原體、衣原體、淋球菌、病毒等。陰道炎根據(jù)感染的病原體不同而又分為細(xì)菌性陰道病(bacterial?vaginosis,BV)、外陰陰道念珠菌病(vulvovaginal?candidiasis,VVC)和滴蟲性陰道炎(trichomonal?vaginitis,TV)。細(xì)菌性陰道病感染的病原菌主要包括需氧菌(糞腸球菌、金黃色葡萄球菌、B族鏈球菌)和厭氧菌(陰道加德納菌、陰道阿托波爾菌、動(dòng)彎桿菌)；外陰陰道念珠菌病曾稱為霉菌性陰道炎、外陰陰道假絲酵母菌病等，是由念珠菌引起的女性生殖道感染性疾病，其病原菌是以白念珠菌為主的酵母菌，其他如光滑念珠菌、熱帶念珠菌、克柔念珠菌等非白念珠菌占少數(shù)；滴蟲性陰道炎感染的病原菌是陰道毛滴蟲。