[發(fā)明專利]一種快速測定植物POD的方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201810535221.7
• 申請日: 2018-05-30
• 公開（公告）號: CN108717050A
• 公開（公告）日: 2018-10-30
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 吳瑞香;楊建春;韓志平;王利琴;郭秀娟;帥媛媛;馮學金
• 申請（專利權(quán)）人: 山西省農(nóng)業(yè)科學院高寒區(qū)作物研究所
• 主分類號: G01N21/31
• 分類號: G01N21/31;G01N1/30;G01N1/28
• 代理公司: 北京科億知識產(chǎn)權(quán)代理事務所(普通合伙) 11350
• 代理人: 湯東鳳

本發(fā)明公開了一種快速測定植物POD的方法，包括水浴浸泡、樣品研磨、酶液提取、酶活力測定，本發(fā)明的有益效果是：將傳統(tǒng)方法，研磨效果好，特別是對于質(zhì)地硬的植物組織，如種子等可達到簡單、快速檢測植物中的POD酶活力的目的，有利于實現(xiàn)批量操作。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于植物酶活力檢測方法技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種快速測定植物POD的方法。

背景技術(shù)

植物在生理代謝過程中伴隨著部分電子逃逸，產(chǎn)生具有毒害作用的高能量活性氧，其中包括O2-、H2O2、單線態(tài)氧、羥自由基等。植物細胞的葉綠體、線粒體和質(zhì)膜等是活性氧產(chǎn)生的主要場所。這些活性氧的積累會使植物細胞受到氧脅迫。為了減輕活性氧對細胞的破壞，維持體內(nèi)活性氧的動態(tài)平衡，植物在進化過程中逐漸形成一套抗氧化酶促系統(tǒng)，包括超氧化物歧化酶(SOD)、過氧化氫酶(CAT)和過氧化物酶(POD)。這三種酶的作用分別是SOD催化O2-歧化反應生成H2O2，CAT分解H2O2，POD清除O2-、H2O2和其他過氧化物，與植物的生理代謝和抗逆性有密切關(guān)系。植物在生長發(fā)育過程中會受到各種不良環(huán)境的影響，包括生物脅迫和非生物脅迫。處于逆境下的植物往往會產(chǎn)生大量活性氧，從而也引起抗氧化酶促系統(tǒng)中的酶產(chǎn)生量發(fā)生變化以清除過多的活性氧、減少植物受到的氧脅迫。SOD、CAT和POD酶活力的變化能反映出植物所受到的脅迫狀況及植物抗逆能力的強弱。因此，上述三種酶是植物生理研究中的重要研究對象，其酶活力的檢測是其重要環(huán)節(jié)。

酶活力(enzyme activity)也稱為酶活性，是指酶催化一定化學反應的能力。酶活力的大小可用在一定條件下，酶催化某一化學反應的速度來表示，酶催化反應速度愈大，酶活力愈高，反之活力愈低。測定酶活力實際就是測定酶促反應的速度。酶促反應速度可用單位時間內(nèi)、單位體積中底物的減少量或產(chǎn)物的增加量來表示。

POD酶活力的檢測方法：

先用冰浴研磨法和0.05mol/L pH 6.0磷酸緩沖液制備粗酶液，然后用愈創(chuàng)木酚法測POD酶活力；

取1g植物葉片等組織于預冷的研缽中，加入預冷的0.05mol/LpH 6.0磷酸緩沖液，研磨成漿，定容后低溫離心，上清液為POD粗酶液；

愈創(chuàng)木酚法測定POD酶活力：酶促反應體系包含0.05mol/L pH 6.0磷酸緩沖液、0.01mol/L H2O2、0.005mol/L愈創(chuàng)木酚溶液和0.01-1mL酶液；將上述反應體系于波長470nm下測定吸光度的變化量，以每分鐘吸光度變化0.01為一個酶活單位計算POD酶活性。

上述傳統(tǒng)方法的缺點主要是：冰浴研磨法步驟繁瑣，費時費力，批量操作困難；樣品需要量較多，工作量較大。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的主要目的是針對上述現(xiàn)有技術(shù)中檢測POD酶活力時，采用冰浴研磨法步驟繁瑣、費時費力、批量操作困難，提供一種快速測定植物POD的方法，可簡化操作，省時省力，并減少樣品和試劑用量等。

為了實現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下：

一種快速測定植物POD的方法，其特征是包括下述主要步驟：

(1)、水浴浸泡：

取新鮮或超低溫保存的植物葉片或其它組織，在水浴中浸泡10min～20min；

(2)、樣品研磨：

采用液氮研磨法進行研磨；液氮研磨法，即將樣品浸入液氮后用研磨棒研磨；

(3)、酶液提?。?/p>

將上述步驟(2)研磨后的樣品加入0～4℃預冷的濃度為0.1～0.4mol/L、pH6.5～7.5的磷酸緩沖液進行浸提30min～12h，0～4℃下離心處理，取上清液，POD酶液，0～4℃保存?zhèn)溆茫?/p>

(4)、酶活力測定：