[發明專利]區分非小細胞肺癌細胞與正常肺部細胞的生物標志物研究

在審

• 申請號: 201810534672.9
• 申請日: 2018-05-29
• 公開（公告）號: CN110542727A
• 公開（公告）日: 2019-12-06
• 發明（設計）人: 栗智;畢開順;李清;畢文川;于鑫淼;趙士博
• 申請（專利權）人: 沈陽藥科大學
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/54
• 代理公司: 21207 沈陽杰克知識產權代理有限公司
• 代理人: 靳玲<國際申請>=<國際公布>=<進入國

本發明屬于醫藥技術領域，建立了一種測定肺成纖維細胞(MRC?5)內鳥氨酸、1,3?丙二胺、尸胺、腐胺、乙酰化腐胺、精脒、乙酰化精脒、二乙酰化精脒、精胺、乙酰化精胺、二乙酰化精胺、酪氨酸、多巴胺、去甲腎上腺素、色氨酸和組胺等17種生物胺含量的HILIC?UHPLC?MS/MS方法。應用已建立方法測定了人肺成纖維細胞(MRC?5)與小細胞肺癌細胞(NCI?H446)中17種生物胺的含量，可實現對肺癌細胞與正常肺細胞之間的區分，并通過獨立樣本t?檢驗和ROC分析篩選出了13種肺腺癌標記物。該方法能夠簡單快速地同時測定肺成纖維細胞中的17種生物胺的含量。

技術領域

本發明涉及用于評估小細胞肺癌疾病的新生物標記物,所述生物標記物對肺癌病理學改變較敏感,特 別是在疾病或損傷早期階段。此外,本發明涉及用于評估人患肺癌的風險。

背景技術

肺癌是目前全球發病率和死亡率極高的惡性腫瘤，嚴重威脅人類的身體健康。肺癌按病理學特征分為 非小細胞肺癌(NSCLC)和小細胞肺癌(SCLC)。非小細胞肺癌又分為肺鱗癌、肺腺癌和大細胞肺癌，其中 肺鱗癌是非小細胞肺癌主要的類型，非小細胞肺癌的病死率占肺癌的85％以上，癌細胞生長分裂較慢，擴 散轉移相對較晚。小細胞肺癌屬于未分化癌，其病理類型包括燕麥細胞型、中間細胞型和復合燕麥細胞型， 小細胞肺癌惡性程度較高，生物學行為惡劣，預后兇險。

近年來，人們對肺癌的研究不斷深入，對肺癌治療的認識也在逐漸發展，如今肺癌臨床治療已經進入 了綜合治療的新時代，主要方法為化學治療、放射治療、手術切除、靶向治療以及這幾種方法的聯合治療。 世界衛生組織將癌癥定義為一種可防治的慢性病，在臨床治療中，一些癌癥在早期是可以治愈的。但是， 任何一種有效的肺癌治療方法都離不開對肺癌類型的精準診斷。開展肺癌早期診斷方法對于提高肺癌患者 生存率具有重要意義。早期診斷方式主要有影像學診斷，病理學診斷和癌癥標記物診斷。與其他檢查手段 相比，癌癥標記物診斷能夠在癌變早期篩查出肺部的異常，且具有操作簡便、無創傷等優點，在臨床上應 用較廣。

代謝組學是繼基因組學、轉錄組學和蛋白質組學之后興起的系統生物學的一個新的分支，它是通過考 察生物體系受刺激或擾動前后(如將某個特定的基因變異或環境變化后)代謝產物圖譜及其動態變化研究 生物體系的代謝網絡的一種技術，研究對象主要是相對分子質量1000以下的內源性小分子。與轉錄組學 和蛋白質組學等其他組學相比，代謝組學具有以下優點：(1)基因和蛋白表達的微小變化會在代謝物水平 得到放大；(2)代謝組學的研究不需進行全基因組測序或建立大量表達序列標簽的數據庫；(3)代謝物的種 類遠少于基因和蛋白的數目；(4)生物體液的代謝物分析可反映機體系統的生理和病理狀態。通過代謝組 學研究既可以發現生物體在受到各種內外環境擾動后的應答不同,也可以區分同種不同個體之間的表型 差異由于機體的病理變化，代謝產物也產生了某種相應的變化。對這些由疾病引起的代謝產物的響應進 行分析，即代謝組學分析,能夠幫助人們更好的理解病變過程及機體內物質的代謝途徑，還有助于疾病的 生物標記物的發現和輔助臨床診斷的目的。

發明內容

建立了一種測定肺成纖維細胞(MRC-5)內鳥氨酸、1,3-丙二胺、尸胺、腐胺、乙酰化腐胺、精脒、乙 酰化精脒、二乙酰化精脒、精胺、乙酰化精胺、二乙酰化精胺、酪氨酸、多巴胺、去甲腎上腺素、色氨酸 和組胺等17種生物胺含量的HILIC-UHPLC-MS/MS方法。應用已建立方法測定了人肺成纖維細胞(MRC-5) 與肺腺癌細胞(A549)中17種生物胺的含量，可實現對肺癌細胞與正常肺細胞之間的區分，并通過獨立 樣本t-檢驗和ROC分析篩選出了11種肺腺癌標記物。可以將非小細胞肺癌患者與健康人區分開來。

附圖說明

圖1為利用SPSS19.0軟件對以上采用上述方法對17種生物胺進行含量測定的結果進行系統聚類分析， 所得到的樹狀圖。

具體實施方式

實施例1

細胞收集