[發(fā)明專利]一種檢測甲基苯丙胺的試紙條及其制備方法和應(yīng)用方法

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• 申請?zhí)枺?/td>: 201810531120.2
• 申請日: 2018-05-29
• 公開（公告）號: CN108845151A
• 公開（公告）日: 2018-11-20
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 賈嘉;張振興;呂小翠;趙琳;周亮;崔浩哲;張鵬;高翔
• 申請（專利權(quán)）人: 鄭州左安檢測科技有限公司
• 主分類號: G01N33/94
• 分類號: G01N33/94;G01N33/577;G01N33/558;G01N33/533
• 代理公司: 北京眾合誠成知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11246
• 代理人: 趙娟

1.一種檢測甲基苯丙胺的試紙條，包括樣品吸收墊、結(jié)合物釋放墊、反應(yīng)膜、吸水墊和底板；其特征在于：所述結(jié)合物釋放墊上噴涂有時(shí)間分辨熒光微球標(biāo)記的抗體；所述反應(yīng)膜上包被有半抗原-載體蛋白偶聯(lián)物的檢測線和羊抗鼠二抗的質(zhì)控線。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試紙條，其特征在于：所述樣品吸收墊、結(jié)合物釋放墊、反應(yīng)膜和吸水墊均粘貼在底板上且中任意相鄰兩個(gè)沿上下方向部分疊加，結(jié)合物釋放墊的1/3-1/2被覆蓋于樣品吸收墊下。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試紙條，其特征在于：所述時(shí)間分辨熒光微球是直徑為100nm-500 nm的稀土離子作為標(biāo)記物的熒光微球，其表面修飾有功能基團(tuán)，用于蛋白、抗體和核酸的共價(jià)偶聯(lián)。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的試紙條，其特征在于：所述時(shí)間分辨熒光微球的激發(fā)波長為300-400 nm，發(fā)射波長為500-700 nm。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試紙條，其特征在于：所述結(jié)合物釋放墊為玻璃纖維或聚酯材料。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試紙條，其特征在于：所述反應(yīng)膜為硝酸纖維素膜或醋酸纖維素膜。

7.一種制備權(quán)利要求1-6任一項(xiàng)所述試紙條的方法，其特征在于，包括以下步驟：

1）用熒光微球標(biāo)記甲基苯丙胺抗體，并將其噴涂在結(jié)合物釋放墊上，以制備噴涂有甲基苯丙胺單克隆抗體-熒光微球標(biāo)記物的結(jié)合物釋放墊；

2）將半抗原-載體蛋白偶聯(lián)物和羊抗鼠二抗分別噴涂于反應(yīng)膜上作為檢測線（T）和質(zhì)控線（C）；

3）將1）和2）制備好的結(jié)合物釋放墊、反應(yīng)膜與樣品吸收墊、吸水墊和底板組裝成試紙條。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的制備試紙條的方法，其特征在于：在步驟1）中取出熒光微球進(jìn)行活化，然后加入甲基苯丙胺抗體進(jìn)行共價(jià)偶聯(lián)，結(jié)束后加入封閉緩沖液進(jìn)行封閉，離心洗滌后4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

9.根據(jù)權(quán)利要求7所述的制備試紙條的方法，其特征在于：在步驟1）中的結(jié)合物釋放墊用含0.2-1%牛血清白蛋白（質(zhì)量分?jǐn)?shù)）、pH 7.4的0.02-0.05 mol/L Tris-HCl（含0.1-5 %的海藻糖和0.02-0.1% Tween-20）緩沖液浸泡2 h，37℃下烘干2 h，置于干燥環(huán)境中保存?zhèn)溆谩?/p>

10.一種應(yīng)用權(quán)利要求1-6任一項(xiàng)所述檢測甲基苯丙胺的試紙條檢測樣品中甲基苯丙胺的方法，其特征在于，該方法包括以下步驟：

1）將試紙條和待測樣品恢復(fù)至室溫；

2）開啟免疫熒光分析儀，插入對應(yīng)ID卡，讀取標(biāo)準(zhǔn)曲線；

3）向試紙條的樣品孔中加入待測樣本60-120μL，反應(yīng)5-10min后，將檢測卡插入免疫熒光分析儀；

4）截留在檢測線和質(zhì)控線的熒光微球在最佳激發(fā)光下，發(fā)出強(qiáng)烈的熒光條帶；

5）采用免疫層析分析儀讀取檢測線和質(zhì)控線的熒光強(qiáng)度，并給出T/C值，分析儀可通過內(nèi)置的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出樣品中甲基苯丙胺的濃度，并判斷陰陽性。