[發(fā)明專利]MTHFR基因片段作為母豬肢蹄骨密度相關(guān)的SNP分子標(biāo)記

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810529074.2
• 申請(qǐng)日: 2018-05-27
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN108411005B
• 公開(kāi)（公告）日: 2020-01-14
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉向東;馮帥飛;趙書(shū)紅;李新云;劉小磊;尹立林;唐振雙;葉燈燈;馬官軍
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 華中農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號(hào): C12Q1/6888
• 分類號(hào): C12Q1/6888
• 代理公司: 42001 武漢宇晨專利事務(wù)所
• 代理人: 張紅兵

本發(fā)明屬于動(dòng)物分子標(biāo)記篩選技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及MTHFR基因片段作為母豬肢蹄骨密度相關(guān)的SNP分子標(biāo)記。該分子標(biāo)記克隆自登陸號(hào)為M1GA0008657的MTHFR基因片段，通過(guò)基因芯片技術(shù)對(duì)該基因進(jìn)行分型篩選得到一種與母豬肢蹄骨密度相關(guān)的分子標(biāo)記，該標(biāo)記的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示，在該序列的第51位的堿基處存在一個(gè)A/C的等位基因突變，當(dāng)SEQ ID NO：1上的第51位的核苷酸為A時(shí)，則母豬的肢蹄具有更高的骨密度。公開(kāi)了篩選與母豬肢蹄骨密度相關(guān)分子標(biāo)記的方法及其關(guān)聯(lián)分析方法的應(yīng)用。本發(fā)明為豬肢蹄結(jié)實(shí)度性狀尤其是骨密度的標(biāo)記輔助選擇提供了一個(gè)新的SNP分子標(biāo)記。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及豬分子標(biāo)記制備技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及MTHFR基因片段作為母豬肢蹄骨密度相關(guān)的SNP分子標(biāo)記。本發(fā)明的分子標(biāo)記克隆自MTHFR基因，可用于對(duì)豬肢蹄骨密度性狀的預(yù)測(cè)。

背景技術(shù)

隨著科技的發(fā)展，豬養(yǎng)殖業(yè)在遺傳育種、營(yíng)養(yǎng)調(diào)控以及疾病防控等方面均取得了顯著突破，商品豬的瘦肉率、料肉比以及生長(zhǎng)速度均有了巨大的提升。但伴隨集約化養(yǎng)殖而來(lái)的便是日益突出的肢蹄問(wèn)題，為了集約化生產(chǎn)，豬群的活動(dòng)范圍有限，另外欄舍的設(shè)計(jì)(漏縫地板)更是加劇了豬肢蹄病的發(fā)生。據(jù)報(bào)道，在所有通過(guò)性能測(cè)定的后備公豬中，有20-50％的后備公豬因肢蹄軟弱而被淘汰，在生產(chǎn)母豬中由于肢蹄軟弱而被淘汰的母豬也高達(dá)6.1-15％(張徐非等，位置功能候選基因HMGA1、C6orf106和ENSSSCG00000023160與豬肢蹄結(jié)實(shí)度的關(guān)聯(lián)性[J]，中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué),2016,49(20):4030-4039)。另外，由于生產(chǎn)成本的限制，豬的肢蹄一旦出現(xiàn)問(wèn)題，只有極少數(shù)能夠被治愈(郭春艷，淺談母豬肢蹄病的發(fā)病原因及防治措施[J].農(nóng)家致富顧問(wèn),2017(16):20-20)，絕大多數(shù)則采取淘汰措施，給豬養(yǎng)殖業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。

肢蹄結(jié)實(shí)度，是指肢蹄健康程度和四肢運(yùn)動(dòng)協(xié)調(diào)程度的綜合反應(yīng)，但為了研究方便一般用其對(duì)立面-肢蹄軟弱(leg weakness)來(lái)衡量?？偟膩?lái)說(shuō)，肢蹄結(jié)實(shí)度可以從肢蹄評(píng)分、步態(tài)評(píng)分、腿型評(píng)分、骨礦物含量和骨密度、軟骨病評(píng)分、關(guān)節(jié)面軟骨評(píng)分及肱二頭肌長(zhǎng)度等多個(gè)方面衡量(候利娟等，豬肢蹄結(jié)實(shí)度的遺傳解析進(jìn)展.豬業(yè)科學(xué)2013:94-7)。而骨密度是人類骨質(zhì)疏松診斷的一個(gè)重要參照標(biāo)準(zhǔn)(程曉光，骨密度測(cè)量和骨質(zhì)疏松診斷[J].，國(guó)際內(nèi)分泌代謝雜志,2005,25(5):308-310)。另外，有報(bào)道稱骨密度(Bone MineralDensity,BMD)可以反映骨骼強(qiáng)度的58-70％(曹海偉等，定量超聲與雙能骨密度測(cè)定在骨質(zhì)疏松診斷中的應(yīng)用及評(píng)價(jià)[J]，中國(guó)骨質(zhì)疏松雜志,2001,7(2):110-112)。由此可見(jiàn)，骨密度在動(dòng)物骨骼強(qiáng)度的研究中是一個(gè)重要指標(biāo)，但由于各種生產(chǎn)條件的限制，人們對(duì)于家畜骨骼的研究十分罕見(jiàn)。

骨密度，即單位體積骨礦物質(zhì)的含量，單位為g/cm3，常見(jiàn)的骨密度測(cè)定方法有放射吸收法、雙能X射線測(cè)定法、定量計(jì)算機(jī)斷層掃描技術(shù)以及軸向超聲波傳播技術(shù)等(曹健，骨密度(BMD)測(cè)定的應(yīng)用評(píng)價(jià)[J]，醫(yī)藥前沿,2013(2))，其中雙能X射線測(cè)定法及定量計(jì)算機(jī)斷層掃描技術(shù)應(yīng)用最廣，但雙能X射線測(cè)量技術(shù)測(cè)定得為面積骨密度，受物體幾何體積的影響，而定量計(jì)算機(jī)斷層掃描技術(shù)可以更準(zhǔn)確地測(cè)量動(dòng)物骨密度，但其設(shè)備價(jià)格昂貴(劉珺，雙能X線骨密度儀與定量CT測(cè)量骨密度的比較研究[D].中南大學(xué)學(xué)報(bào),2005)，且操作十分麻煩(對(duì)于大型家畜需要麻醉后進(jìn)行)，大大限制了其在動(dòng)物骨密度研究中的應(yīng)用。而超聲波骨軸傳播技術(shù)，是近年來(lái)新興的一種骨密度測(cè)定技術(shù)，其不僅能夠測(cè)定動(dòng)物骨密度，在一定程度上還可以反映動(dòng)物骨強(qiáng)度及骨結(jié)構(gòu)的情況，具有簡(jiǎn)便、無(wú)輻射損傷、重復(fù)精度高、且價(jià)格便宜，易于攜帶的優(yōu)點(diǎn)(孫濤等，骨密度無(wú)損測(cè)定方法簡(jiǎn)介及其最新進(jìn)展[J]，中國(guó)醫(yī)療設(shè)備,2009,24(1):49-51)。由此可以看出，利用超聲骨軸傳播技術(shù)測(cè)定豬肢蹄骨密度，并利用GWAS篩選出與中肢蹄骨密度相關(guān)的SNP分子標(biāo)記，為家豬肢蹄性狀的遺傳選良提供了一種可行途徑，對(duì)于豬養(yǎng)殖業(yè)具有重要意義。

本發(fā)明中發(fā)現(xiàn)的SNP與豬肢蹄骨密度性狀的相關(guān)性達(dá)到了顯著水平，為家豬肢蹄結(jié)實(shí)度性狀的研究提供了新的遺傳資源。

發(fā)明內(nèi)容