[發明專利]一種用于檢測淋巴癌易感性相關的SNP位點的引物及檢測方法

在審

• 申請號: 201810527336.1
• 申請日: 2018-05-29
• 公開（公告）號: CN108531602A
• 公開（公告）日: 2018-09-14
• 發明（設計）人: 李曉瑞;張蓉;彭柯又;楊興
• 申請（專利權）人: 成都中創清科醫學檢驗所有限公司
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886;C12Q1/6869;C12N15/11
• 代理公司: 成都正華專利代理事務所(普通合伙) 51229
• 代理人: 李林合

1.一種用于檢測淋巴癌易感性相關的SNP位點的引物，其特征在于，所述引物包括rs872071位點的引物、rs2647012位點的引物、rs1045241位點的引物、rs6773854位點的引物以及rs6421571位點的引物；

其中，rs872071位點的引物為F：5′-GAACAACTCTGGGAGTCT-3′和R：5′-CTCTCTGAAGGAACGTAAC-3′；

rs2647012位點的引物為F：5′-GATATGCAGTATTAGGTGGT-3′和R：5′-TAGACCAGTCAGTTGCTTAC-3′；

rs1045241位點的引物為F：5′-GTGGATTATACCTTTGACC-3′和R：5′-GTCGATGACTCAATCTTAAC-3′；

rs6773854位點的引物為F：5′-CTTTACCAATCCACAGACTA-3′和R：5′-GCTGTGTAATGATGAAGAC-3′；

rs6421571位點的引物為F：5′-CTTTCACTGCTGAGTTAGTT-3′和R：5′-CTCACCAGTTTATCGTTAGT-3′。

2.采用權利要求1所述的引物檢測淋巴癌易感性相關的SNP位點多態性的方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)采集樣品并提取其基因組DNA；

(2)采用所述引物分別對基因組DNA進行目的基因的PCR擴增，并對擴增產物進行膠回收；

(3)對膠回收產物進行濃度測定，計算模板量，然后進行熒光標記PCR反應，并對反應產物進行純化；

(4)將步驟(3)中的純化產物上機測序，并對SNP檢測結果進行分析。

3.根據權利要求2所述的檢測淋巴癌易感性相關的SNP位點多態性的方法，其特征在于，步驟(2)中PCR擴增體系為：DNA模板含量為100-150ng，濃度為5pmol/μL的正向引物3.0μL，濃度為5pmol/μL的反向引物3.0μL，Prime STAR MAX 25.0μL，用ddH₂O補足體積至50μL。

4.根據權利要求2所述的檢測淋巴癌易感性相關的SNP位點多態性的方法，其特征在于，步驟(2)中PCR擴增反應條件為：95℃預變性5min，95℃變性30s，55℃退火15s，72℃延伸15s，進行30個循環，最后72℃延伸5min。

5.根據權利要求2所述的檢測淋巴癌易感性相關的SNP位點多態性的方法，其特征在于，步驟(3)中PCR擴增體系為：DTCS Master Mix 2.5μL，濃度為5pmol/μL的反向引物1.0μL，DNA模板20ng，用ddH₂O補足體積至10μL。

6.根據權利要求2所述的檢測淋巴癌易感性相關的SNP位點多態性的方法，其特征在于，步驟(3)中PCR擴增反應條件為：94℃預變性30s，94℃變性25s，55℃退火25s，60℃延伸3min，30個循環，最后60℃延伸20min。