[發(fā)明專利]抑制circ_CLASP2的試劑在制備鼻咽癌治療制劑中的應(yīng)用及制劑

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810525695.3
• 申請(qǐng)日: 2018-05-28
• 公開（公告）號(hào): CN108721319B
• 公開（公告）日: 2020-04-28
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 熊煒;曾朝陽;郭燦;李桂源;李小玲;熊芳;莫勇真;王裕民;陶文靜;張姍姍;龔朝建;劉凌云
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中南大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N15/11
• 分類號(hào): C12N15/11
• 代理公司: 長沙市融智專利事務(wù)所(普通合伙) 43114
• 代理人: 袁靖

本發(fā)明公開了一種抑制circ_CLASP2的試劑在制備鼻咽癌治療制劑中的應(yīng)用及制劑。通過研究證實(shí)在鼻咽癌細(xì)胞中抑制circ_CLASP2，可以抑制鼻咽癌細(xì)胞的增殖和侵襲轉(zhuǎn)移。因此，將circ_CLASP2抑制劑用于治療鼻咽癌，具有深遠(yuǎn)的臨床意義和重要的推廣應(yīng)用前景。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于腫瘤分子生物學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種抑制環(huán)狀RNA circ_CLASP2的試劑在制備鼻咽癌治療制劑中的應(yīng)用和相應(yīng)的制劑。

背景技術(shù)

目前環(huán)狀RNA(Circular RNA)是個(gè)研究熱點(diǎn)，circRNA主要來源于蛋白質(zhì)編碼基因的外顯子區(qū)，也可以由內(nèi)含子區(qū)、UTR區(qū)、基因間區(qū)、非編碼RNA位點(diǎn)及已知轉(zhuǎn)錄物的反義位點(diǎn)形成。CircRNA是由前體RNA(precursor RNA,pre-RNA)反向拼接而形成的一類不具有5‘末端帽子和3’末端poly(A)尾巴并以共價(jià)鍵形成環(huán)形結(jié)構(gòu)的非編碼RNA分子。

CircRNA形成過程可以分為兩大類，即外顯子環(huán)化(exon circularization)和內(nèi)含子環(huán)化(intron circularization)兩大機(jī)制。Jeck等提出外顯子來源的circRNA(exoniccircRNA,ecircRNA)可以分為套索驅(qū)動(dòng)環(huán)化(lariat-driven circularization)和內(nèi)含子配對(duì)驅(qū)動(dòng)環(huán)化(intron-pairing-driven circularization)兩種形成方式，套索驅(qū)動(dòng)環(huán)化是外顯子3’端作為剪接供體(splice donor)攻擊5’端剪接受體(splice receptor),Alu區(qū)共價(jià)結(jié)合而形成套索結(jié)構(gòu)，套索結(jié)構(gòu)進(jìn)行內(nèi)部拼接后切除內(nèi)含子形成circRNA；內(nèi)含子配對(duì)驅(qū)動(dòng)環(huán)化是兩個(gè)內(nèi)含子堿基互補(bǔ)配對(duì)形成環(huán)狀結(jié)構(gòu)后，剪除內(nèi)含子形成circRNA。其實(shí)內(nèi)含子本身也可以環(huán)化，可以形成內(nèi)含子來源circRNA(circular intronic RNA,ciRNA)。CircRNA是由前體mRNA反向拼接而形成的一類不具有5‘末端帽子和3’末端poly(A)尾巴并以共價(jià)鍵形式形成的封閉環(huán)形結(jié)構(gòu)的非編碼RNA分子。有著高度的穩(wěn)定性、保守性、特異性，并且含量高的特點(diǎn)。

CircRNA最早在1976年于RNA病毒中首次發(fā)現(xiàn)，隨后Hsu MT等人使用電子顯微鏡技術(shù)在猴的腎細(xì)胞質(zhì)中發(fā)現(xiàn)了circRNA的存在。在1996年，circRNA在人類細(xì)胞中被發(fā)現(xiàn)，隨著RNA-seq新一代測(cè)序技術(shù)的發(fā)展，近年來越來越多的circRNA被發(fā)現(xiàn)，目前為止已知的circRNA數(shù)目已經(jīng)達(dá)到三萬多個(gè)。CircRNA也不再被認(rèn)為是錯(cuò)誤的RNA轉(zhuǎn)錄本，而是作為非編碼RNA研究中的耀眼之星冉冉升起。篩選和驗(yàn)證更多的新型circRNA作為腫瘤診斷和預(yù)后的生物標(biāo)志物及其應(yīng)用，并能盡早在專利領(lǐng)域得到好的保護(hù)，能顯著提升我國在該技術(shù)領(lǐng)域的國際競爭力。

鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma，NPC)屬于頭頸部腫瘤，起源于鼻咽部上皮組織。一般在鼻咽部的后外側(cè)隱窩(羅森繆勒窩，F(xiàn)ossa of Rosenmüller)處發(fā)病，此處的鼻咽癌細(xì)胞易侵襲鄰近的組織和器官。由于鼻咽癌的發(fā)生發(fā)展是由積累的家族遺傳和體細(xì)胞遺傳突變及表觀遺傳學(xué)突變導(dǎo)致的多階段復(fù)雜基因調(diào)控過程，涉及到原癌基因和抑癌基因的激活和沉默、及非編碼RNA參與的表觀遺傳學(xué)調(diào)控等等。所以鼻咽癌發(fā)生發(fā)展的具體分子機(jī)制尚不明確，而且由于腫瘤異質(zhì)性和個(gè)體差異性，傳統(tǒng)的放療聯(lián)合化療的療效不顯著。因此通過circRNA探究其與鼻咽癌發(fā)生發(fā)展機(jī)制，進(jìn)一步為鼻咽癌的診斷，以及控制鼻咽癌增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移將是研究的熱點(diǎn)。

我們?cè)诒茄拾┘?xì)胞5-8F細(xì)胞的RNA-seq中檢測(cè)到長度449bp的circ_CLASP2,其是CLASP2基因2、3、4、5、6號(hào)外顯子五個(gè)外顯子反向拼接形成的環(huán)狀RNA。通過試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)該環(huán)狀RNA與鼻咽癌的發(fā)生發(fā)展存在關(guān)聯(lián)，有可能作為鼻咽癌診斷標(biāo)記物，以及治療的靶點(diǎn)。

發(fā)明內(nèi)容