[發明專利]一種轉座酶-抗體結合蛋白的融合蛋白及其制備與應用

在審

• 申請號: 201810523164.0
• 申請日: 2018-05-28
• 公開（公告）號: CN108219006A
• 公開（公告）日: 2018-06-29
• 發明（設計）人: 朱化星;王米;李科;何翼
• 申請（專利權）人: 上海欣百諾生物科技有限公司
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C12N9/12;C12N15/62;C12Q1/6869;C12Q1/6804
• 代理公司: 上海光華專利事務所(普通合伙) 31219
• 代理人: 李艷;許亦琳

1.一種融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白的結構中包括具有轉座功能的第一結構域和具有結合抗體Fc段功能的第二結構域。

2.如權利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，所述第一結構域和所述第二結構域通過連接片段連接。

3.如權利要求2所述的融合蛋白，其特征在于，所述連接片段的結構通式為（GS）_a（GGS）_b（GGGS）_c（GGGGS）_d，其中a、b、c、d均是大于或等于0的整數。

4.如權利要求3所述的融合蛋白，其特征在于，所述連接片段的氨基酸序列可選自以下之任一情況：

（1）GGGGS；

（2）GSGGGGS；

（3）GGSGGSGGGS；

（4）GGGSGGGGSGS；

（5）GGSGGSGGSGGS；

（6）GGGGSGGGGS；

（7）無連接片段。

5.如權利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，所述第一結構域為轉座酶或具有轉座功能的蛋白類似物。

6.如權利要求5所述的融合蛋白，其特征在于，所述第一結構域為具有轉座功能的Tc1/Mariner、hobo、MITEs、hAT、PiggyBac（PB）、TnA轉座酶家族或者有轉座功能的蛋白類似物。

7.如權利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，所述第一結構域為TnA轉座酶家族，所述TnA轉座酶家族選自Tn1、Tn2、Tn3、Tn4、Tn5、Tn6、Tn7、Tn8、Tn9或Tn10。

8.如權利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，所述第一結構域為Tn5轉座酶或Tn10轉座酶。

9.如權利要求8所述的融合蛋白，其特征在于，還包括如下特征中的任一項或多項：（1）所述Tn5轉座酶選自全長Tn5轉座酶、Tn5轉座酶的部分功能域、Tn5轉座酶突變體、帶標簽的全長Tn5轉座酶、帶標簽的Tn5轉座酶的部分功能域或帶標簽的Tn5轉座酶突變體；（2）所述Tn10轉座酶選自全長Tn10轉座酶、Tn10轉座酶的部分功能域、Tn10轉座酶突變體、帶標簽的全長Tn10轉座酶、帶標簽的Tn10轉座酶的部分功能域或帶標簽的Tn10轉座酶突變體。

10.如權利要求9所述的融合蛋白，其特征在于，所述Tn5轉座酶突變體選自如下：R30Q，K40Q，Y41H，T47P，E54K/V，M56A，R62Q，D97A，E110K，D188A，Y319A，R322A/K/Q，E326A，K330A/R，K333A，R342A，E344A，E345K，N348A，L372P，S438A，K439A，S445A，G462D，A466D。

11.如權利要求9所述的融合蛋白，其特征在于，所述標簽選自如下：HHHHHH、DYKDDDDK、YPYDVPDYA、GGLLISGGAL。

12.如權利要求9所述的融合蛋白，其特征在于，還包括如下特征中的任一項或多項：（1）所述全長Tn5轉座酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示；（2）所述全長Tn10轉座酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

13.如權利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，所述第二結構域為金黃色葡萄球菌A蛋白（ProteinA）、鏈球菌G蛋白（ProteinG）、鏈球菌L蛋白（ProteinL）或其他具有結合抗體Fc段功能的蛋白類似物。