[發(fā)明專利]一種分子標(biāo)記輔助選育長(zhǎng)莢豇豆品種的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810517130.0
• 申請(qǐng)日: 2018-05-25
• 公開（公告）號(hào): CN108660248B
• 公開（公告）日: 2021-12-17
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 徐沛;苑希蕊;吳新義;汪寶根;周雯;吳曉花;汪穎;魯忠富;李國(guó)景
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 浙江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院
• 主分類號(hào): C12Q1/6895
• 分類號(hào): C12Q1/6895;C12Q1/6858
• 代理公司: 杭州五洲普華專利代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 33260
• 代理人: 龔玉平

1.一種分子標(biāo)記輔助選育長(zhǎng)莢豇豆品種的方法，其特征在于，包括如下步驟：

1)群體構(gòu)建：利用短莢豇豆品種ZN016和長(zhǎng)莢豇豆品種ZJ282雜交構(gòu)建含若干單株的F₂群體，提取F₂植株DNA；

2)DNA提取：利用瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)DNA質(zhì)量，稀釋DNA濃度到50ng/μL備用；

3)表型調(diào)查：在F₂群體豇豆豆莢完全成熟莢長(zhǎng)不再伸長(zhǎng)時(shí)，每株選取10個(gè)成熟豆莢用直尺量取豆莢長(zhǎng)度，取平均數(shù)作為莢長(zhǎng)表型；

4)作圖標(biāo)記基因型分析：根據(jù)豇豆莢長(zhǎng)QTL粗定位結(jié)果，在國(guó)際豇豆整合遺傳圖譜上選擇多個(gè)SNP標(biāo)記對(duì)F2群體進(jìn)行SNP基因型分析；

5)與莢長(zhǎng)緊密連鎖的SNP標(biāo)記的獲得：對(duì)多個(gè)SNP標(biāo)記進(jìn)行連鎖作圖，構(gòu)建區(qū)域性飽和遺傳圖譜，根據(jù)F₂基因型和表型數(shù)據(jù)掃描QTL，檢測(cè)到LOD值最高的主效QTL，該QTL即為與豇豆莢長(zhǎng)基因緊密連鎖SNP標(biāo)記之一；

6)SNP標(biāo)記轉(zhuǎn)化為CAPS標(biāo)記：根據(jù)步驟5)所得SNP標(biāo)記的側(cè)翼序列來比對(duì)豇豆基因組，得到了一段236bp的序列，并找到能夠引起酶切多態(tài)性的限制性內(nèi)切酶HpaII識(shí)別位點(diǎn)，根據(jù)上述236bp序列，設(shè)計(jì)跨越HpaII識(shí)別位點(diǎn)的側(cè)翼引物F引物和R引物，利用上述引物對(duì)豇豆長(zhǎng)莢和短莢親本DNA分別進(jìn)行PCR擴(kuò)增，再用HpaII酶對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行酶切揭示多態(tài)性，所述的F引物和R引物分別為，F(xiàn)引物：TAGCCACCACCATCTTCCTC，R引物：CTCGCAGTTTGGAGCATCTT；

7)利用CAPS標(biāo)記輔助篩選長(zhǎng)莢后代：利用上述引物對(duì)待測(cè)豇豆雜交或回交后代進(jìn)行PCR擴(kuò)增，利用HpaII酶對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行酶切后電泳，若待測(cè)樣品出現(xiàn)與短莢親本相同的帶型則該材料具有和短莢親本一致的莢長(zhǎng)QTL基因型，可推斷該材料為短莢材料；若待測(cè)樣品出現(xiàn)與長(zhǎng)莢親本相同的帶型則該材料具有和父本一致的莢長(zhǎng)基因型，可推斷該材料為長(zhǎng)莢材料。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種分子標(biāo)記輔助選育長(zhǎng)莢豇豆品種的方法，其特征是，步驟1)中F₂代群體獲得方法是來自以ZN016為母本，以ZJ282為父本雜交獲得F₁后再自交，所述的F₂代群體植株數(shù)量不少于2000個(gè)單株。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種分子標(biāo)記輔助選育長(zhǎng)莢豇豆品種的方法，其特征是，步驟4)與步驟5)中所述的多個(gè)SNP標(biāo)記數(shù)量為433個(gè)。