[發明專利]重金屬鉛離子的檢測試劑盒及其應用

在審

• 申請號: 201810517009.8
• 申請日: 2018-05-25
• 公開（公告）號: CN108508213A
• 公開（公告）日: 2018-09-07
• 發明（設計）人: 馬嵐;吳峰;毛茅;岑瑜
• 申請（專利權）人: 清華大學深圳研究生院
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢;張立娜

1.一種重金屬鉛離子的檢測試劑盒，含有試紙條和經超順磁性熒光復合粒子標記的第一抗體；所述第一抗體能夠特異結合重金屬鉛離子；

所述試紙條由依次連接并固定于基底層上的樣品墊、設有檢測線和質控線的包被膜，以及吸水墊組成；

所述檢測線和所述質控線相互分離；

所述檢測線處包被有載體蛋白偶聯重金屬鉛離子抗原；

所述質控線處包被有二抗，所述二抗為抗所述第一抗體的抗體；

所述檢測線位于所述包被膜靠近所述樣品墊的一端；

所述質控線位于所述包被膜靠近所述吸水墊的一端。

2.根據權利要求1所述的產品，其特征在于：所述經超順磁性熒光復合粒子標記的第一抗體為將所述第一抗體與所述超順磁性熒光復合粒子通過肽鍵共價結合形成的聚合體；

和/或

所述第一抗體為能夠特異結合重金屬鉛離子的多克隆抗體或單克隆抗體；

和/或

所述載體蛋白偶聯重金屬鉛離子抗原是通過將所述載體蛋白偶聯氨基功能化EDTA并螯合重金屬鉛離子得到的；

和/或

所述樣品墊為玻璃纖維素膜，所述包被膜為硝酸纖維素膜。

3.根據權利要求1或2所述的產品，其特征在于：所述超順磁性熒光復合粒子為超順磁性熒光復合微球；

進一步地，所述超順磁性熒光復合微球為Fe₃O₄磁性納米粒子與CdSe/ZnS熒光材料經包覆SiO₂并表面修飾羧基功能化基團的復合微球；和/或

所述超順磁性熒光復合微球的直徑為10-500nm，優選地，為50-400nm，更優選地，為100-300nm；

所述超順磁性熒光復合微球的磁飽和強度為40～120emu/g，對應的外磁場響應速度為30～120秒；進一步地，所述超順磁性復合粒子的磁飽和強度為40～80emu/g，對應的外磁場響應速度為30～60秒；

所述超順磁性熒光復合微球功能化基團羧基的含量為40～400μmol/g；進一步地，所述羧基的含量為60～100μmol/g。

4.根據權利要求1-3中任一所述的產品，其特征在于：

所述載體蛋白偶聯重金屬鉛離子抗原按照包括如下步驟的方法制備：

(a1)將所述載體蛋白溶于濃度為0.05M、pH值為9.6的硼酸鹽緩沖液中，得到載體蛋白溶液；

所述載體蛋白和所述濃度為0.05M、pH值為9.6的硼酸鹽緩沖液的配比為100mg：10mL；

(a2)將Aminobenzyl-EDTA溶于1M鹽酸中，然后0℃攪拌下滴加濃度為0.2M的NaNO₂溶液，反應，得到Aminobenzyl-EDTA溶液；

所述Aminobenzyl-EDTA、所述1M鹽酸和所述濃度為0.2M的NaNO₂溶液的配比為9mg：4mL：150μL；

(a3)將步驟(a2)得到的所述Aminobenzyl-EDTA溶液滴加到步驟(a1)得到的所述載體蛋白溶液中，并用調節pH至8.5，反應，然后調節pH至7.5，加入濃度為0.5M的重金屬鉛離子溶液，再反應，得到反應液；

所述Aminobenzyl-EDTA溶液、所述載體蛋白溶液、所述濃度為0.5M的重金屬鉛離子溶液的配比為4.15mL：10mL：90μL；

和/或

所述經超順磁性熒光復合粒子標記的第一抗體按照包括如下步驟的方法制備：

(b1)將每5mg超順磁性熒光復合粒子、0.96mg1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺、1.15mg N-羥基丁二酰亞胺和1mL濃度為0.1M、pH值為4.7的2-(N-嗎啡啉)乙磺酸緩沖液混勻，反應，得到活化后磁性粒子；

(b2)將每5mg步驟(b1)得到活化后磁性粒子、0.1-0.2mg所述第一抗體和0.8mL濃度為50mM pH為8.5的硼砂緩沖液混勻、反應，得到含有偶聯后磁性粒子的反應液；

(b3)向步驟(b2)得到的反應液中加入BSA混勻得到混合液、反應，得到含有封閉后磁性粒子的反應液；所述BSA在所述混合液中的質量百分含量為1％。