[發(fā)明專利]一種鉑-納米花及其制備方法和應用在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 201810516901.4 | 申請日： | 2018-05-25 |
| 公開（公告）號： | CN108690865A | 公開（公告）日： | 2018-10-23 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 萬家余;卜勝君;王奎宇;劉文森 | 申請（專利權(quán)）人： | 軍事科學院軍事醫(yī)學研究院軍事獸醫(yī)研究所 |
| 主分類號： | C12Q1/04 | 分類號： | C12Q1/04;C12Q1/10;G01N33/569;C12R1/19;C12R1/42 |
| 代理公司： | 長春眾邦菁華知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 22214 | 代理人： | 于曉慶 |
| 地址： | 130122 吉林省*** | 國省代碼： | 吉林;22 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 納米花 靶標 制備方法和應用 食源性病原菌 食源性 磁珠 病菌 三明治 夾心免疫復合物 磷酸鹽緩沖液 食源性致病菌 一次性注射器 讀取 傳感器體系 鏈霉親和素 待測樣品 恒溫孵育 抗體固定 快速檢測 靈敏度 生物素 產(chǎn)氣 底物 抗體 吸干 修飾 催化 分解 激發(fā) 檢測 | ||
一種鉑?納米花及其制備方法和應用，屬于食源性致病菌快速檢測領(lǐng)域。本發(fā)明的一種靶標食源性病菌的檢測方法采用具有催化H2O2效應的鉑?納米花傳感器體系實現(xiàn)，將修飾生物素Biotin的食源性病原菌抗體固定在標記鏈霉親和素SA的磁珠上；加入待測樣品37℃恒溫孵育2h，用0.1～0.5mM磷酸鹽緩沖液PBS清洗3次后吸干；加入鉑?納米花，在靶標食源性病原菌存在時磁珠上的靶標抗體與鉑?納米花之間形成三明治夾心免疫復合物；加入產(chǎn)氣底物H2O2，激發(fā)H2O2分解并產(chǎn)生氣體，采用一次性注射器吸取氣體并讀取氣體體積，利用氣體體積進行計算實現(xiàn)靶標食源性病菌濃度的測定。本發(fā)明操作簡單、成本低廉、靈敏度高、特異性好。
技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明屬于食源性致病菌快速檢測技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種鉑-納米花及其制備方法和應用。
背景技術(shù)
近幾年，食品安全問題得到了愈加廣泛的關(guān)注，在所有食源性疾病致病因素包括微生物因素、化學物理以及有毒動植物因素中，微生物因素是最重要的致病因素，高居第一位。食源性病原菌作為一種常見微生物，分布極為廣泛，是影響食品安全的最重要的因素之一。因此，開展食源性致病菌的快速檢測研究勢在必行。
目前用于檢測鑒定食源性致病菌的方法主要包括傳統(tǒng)的分離鑒定檢測方法，免疫學法及分子生物學檢測方法。傳統(tǒng)培養(yǎng)方法如平板劃線法，由于操作繁瑣、所需時間長、低靈敏度等原因，已經(jīng)無法滿足現(xiàn)代檢測工作中對快速便捷檢測的要求。酶聯(lián)免疫法(ELISA)方法容易污染，檢測靈敏度受抗原-抗體結(jié)合能力影響，且需要制備高效抗體。常用的聚合酶鏈式反應技術(shù)(PCR)，具有較好的靈敏性，但是PCR技術(shù)需要反復的變溫加熱，所需儀器復雜，對操作人員技術(shù)要求較高。隨著現(xiàn)代食品衛(wèi)生及檢測速度的發(fā)展要求，對食源性致病菌的檢測手段要求操作簡便、靈敏快速、適應性強，顯然上述方法已不能滿足這些要求。
自納米技術(shù)問世以來，因其具有制備簡單、價格低廉、使用壽命長及對環(huán)境要求低等優(yōu)點，通常可以結(jié)合不同生物技術(shù)，提高生物傳感器的靈敏度，是影響最深遠的重大科技進展之一。在食品監(jiān)測以及人類環(huán)境生活等領(lǐng)域中顯示了獨特的優(yōu)勢并得到了廣泛的應用。
2012年Ge等首次發(fā)現(xiàn)蛋白質(zhì)與無機金屬鹽類可以自組裝形成花狀的有機無機雜化納米結(jié)構(gòu)，稱為納米花。研究發(fā)現(xiàn)與納米花雜化的酶同游離酶相比，雜化納米花在酶的活性與穩(wěn)定性方面表現(xiàn)出更加穩(wěn)定優(yōu)越的性能，同時作者對其形成機理做了初步探究。雜化納米花結(jié)構(gòu)一經(jīng)發(fā)現(xiàn)，便引起了研究人員的高度關(guān)注。目前納米花已經(jīng)成功運用于多種領(lǐng)域，如生物傳感器、生物分析、生物醫(yī)藥、污水處理等，但其應用范圍及對象有待進一步開拓創(chuàng)新。因此，開發(fā)新型納米花，在生物監(jiān)測應用等領(lǐng)域具有廣闊的應用前景。
發(fā)明內(nèi)容
為了解決傳統(tǒng)檢測食源性致病菌傳感器存在的成本高、設(shè)計復雜的問題，本發(fā)明提供一種操作簡單、成本低廉、實用性強、靈敏度高、特異性好的一種鉑-納米花及其制備方法和應用。
本發(fā)明為解決技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案如下：
本發(fā)明的一種鉑-納米花，其組成成分為：納米鉑、刀豆蛋白ConA、CuSO4和磷酸鹽緩沖液PBS。
本發(fā)明還提供了一種鉑-納米花的制備方法，包括以下步驟：
取1.5mL離心管，依次加入10～100μL、30mg/mL納米鉑、0.01～0.1mg刀豆蛋白ConA懸浮于800～1500μL、10mM的磷酸鹽緩沖液PBS中，所述磷酸鹽緩沖液PBS中含有20μL、120mM的CuSO4，經(jīng)震蕩混勻、常溫靜置孵育12～24h后，10000rpm離心3～5min，棄上清后加入100μL、0.1mM的磷酸鹽緩沖液PBS懸浮，4℃保存?zhèn)溆谩?/p>
本發(fā)明還提供了一種含有上述鉑-納米花的具有催化H2O2效應的鉑-納米花傳感器體系。
該專利技術(shù)資料僅供研究查看技術(shù)是否侵權(quán)等信息，商用須獲得專利權(quán)人授權(quán)。該專利全部權(quán)利屬于軍事科學院軍事醫(yī)學研究院軍事獸醫(yī)研究所，未經(jīng)軍事科學院軍事醫(yī)學研究院軍事獸醫(yī)研究所許可，擅自商用是侵權(quán)行為。如果您想購買此專利、獲得商業(yè)授權(quán)和技術(shù)合作，請聯(lián)系【客服】
本文鏈接：http://www.szxzyx.cn/pat/books/201810516901.4/2.html，轉(zhuǎn)載請聲明來源鉆瓜專利網(wǎng)。
