[發明專利]奶牛瘤胃菌群的體外培養及保存方法有效
| 申請號： | 201810515572.1 | 申請日： | 2018-05-25 |
| 公開（公告）號： | CN108728375B | 公開（公告）日： | 2020-12-11 |
| 發明（設計）人： | 李勝利;劉晶晶;郭春燕;紀守坤;嚴慧;蔣濤;王雅晶;曹志軍 | 申請（專利權）人： | 中國農業大學 |
| 主分類號： | C12N1/20 | 分類號： | C12N1/20;C12N1/04 |
| 代理公司： | 北京路浩知識產權代理有限公司 11002 | 代理人： | 王文君;黃爽 |
| 地址： | 100193 *** | 國省代碼： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 奶牛 瘤胃 體外 培養 保存 方法 | ||
1.奶牛瘤胃菌群的體外保存方法，其特征在于，向奶牛瘤胃液或其體外培養物中按4％的添加量加入脫脂乳粉，然后冷凍干燥，得到瘤胃液凍干粉，于4℃或室溫密封避光保存；
所述冷凍干燥的步驟為：第一步，-80℃預凍2-4h；第二步，真空度10-12Pa，溫度-40--60℃，真空干燥48-60h；
其中，奶牛瘤胃液體外培養物的制備方法如下：利用雙外流連續培養系統進行奶牛瘤胃菌群的體外培養，具體方法為：將750mL新鮮的奶牛瘤胃液作為接種物接種至已預熱并經CO2飽和的發酵罐中，發酵罐的有效容積為780mL；開啟攪拌和CO2通氣裝置，氣流量為35-45mL/min，以瘤胃液供體牛的TMR日糧作為發酵底物，投料量為36-80g/天，分4-6次等量投料，并向雙外流連續培養系統中輸入緩沖液，將液相消化糜外流速度和固相消化糜外流速度分別控制在4-10％/h和2-7％/h，38.5-40℃發酵培養4-10d，收集流出的固相和液相消化糜振蕩混勻，紗布過濾，獲得含瘤胃菌群的培養物。
2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述奶牛瘤胃液體外培養物的制備方法中，以轉速25-30rpm進行攪拌，運行方式為攪拌25分鐘，間歇5分鐘。
3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述奶牛瘤胃液體外培養物的制備方法中，輸入緩沖液的流速為1.3mL/min，流過濾網的液相消化糜流速為0.65mL/min。
4.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述奶牛瘤胃液體外培養物的制備方法中，所述瘤胃液供體牛為產3-4胎，泌乳天數60-80d的荷斯坦奶牛。
5.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述奶牛瘤胃液體外培養物的制備方法中，收集流出的固相和液相消化糜，在振蕩器中間歇振蕩混勻3-4次，每次振蕩10-15秒，通過雙層紗布過濾，獲得含有瘤胃菌群的培養物。
6.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述奶牛瘤胃液體外培養物的制備方法中，所述緩沖液的配制方法如下：
取標準緩沖液A 2400mL加入到25L容器中，加入水17435mL，再加入礦物鹽溶液B120mL，250.0g/L尿素溶液40mL，攪拌均勻，并以無氧CO2飽和，使用前加入半胱氨酸鹽酸鹽5g；
其中，所述標準緩沖液A的配方為：NaHCO3 24.5g/L、KHCO3 29.0g/L、NaH2PO49.0g/L、KH2PO4 10.2g/L；所述礦物鹽溶液B的配方為：NaCl 47.0g/L、KCL 57.0g/L、MgCl2·6H2O12.8g/L、CaCl2·2H2O 5.3g/L。
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