[發明專利]一種基于Au@Ag核殼納米粒子電化學檢測硫化氫的方法

在審

• 申請號: 201810513390.0
• 申請日: 2018-05-25
• 公開（公告）號: CN108802120A
• 公開（公告）日: 2018-11-13
• 發明（設計）人: 趙媛;楊亞鑫;楊璇;崔林艷
• 申請（專利權）人: 江南大學
• 主分類號: G01N27/26
• 分類號: G01N27/26;G01N27/30;G01N27/48
• 代理公司: 南京經緯專利商標代理有限公司 32200
• 代理人: 張素卿

1.一種基于Au@Ag核殼納米粒子電化學檢測硫化氫的方法，其特征在于，所述方法包括如下步驟：

(1)Au@Ag核殼納米粒子的制備；

(2)Au@Ag核殼納米粒子修飾玻碳電極的制備；

(3)硫化氫的電化學檢測；

(4)Hela細胞中內源性硫化氫的檢測。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述Au@Ag核殼納米粒子的制備方法為：在室溫下，將金納米粒子溶液、磷酸鹽緩沖液、聚乙烯吡咯烷酮溶液與抗壞血酸溶液按比例混合，之后再加入硝酸銀溶液，避光反應3h，離心水洗，制得Au@Ag核殼納米粒子，之后定容形成Au@Ag核殼納米粒子水溶液備用。

3.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，所述金納米離子的粒徑為17.8±1.8nm；所述金納米粒子溶液的粒子濃度為1×10^-8mol/L；所述磷酸鹽緩沖液的pH為7.4；所述聚乙烯吡咯烷酮溶液的質量濃度為0.5～5％，體積用量為400～4000μL；所述抗壞血酸溶液的摩爾濃度為0.05～0.2mol/L，體積用量為500～2000μL；所述硝酸銀溶液的摩爾濃度為1～5mmol/L，體積用量為0.1～10mL。

4.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述Au@Ag核殼納米粒子修飾玻碳電極的制備方法為：

①首先采用三氧化二鋁拋光粉對裸玻碳電極進行拋光處理，用乙醇與超純水超聲清洗30～60s，洗凈后用氮氣吹干；

②然后利用循環伏安法在干凈的玻碳電極表面電鍍上對氨基苯磺酸；將電鍍好的電極浸入五氯化磷溶液中活化5～30分鐘后取出清洗干凈；

③最后在修飾好的電極表面滴涂Au@Ag核殼納米粒子水溶液，靜置后用水沖洗掉多余未連接的粒子晾干備用。

5.根據權利要求4所述的方法，其特征在于，所述三氧化二鋁拋光粉的粒徑為1.0μm、0.5μm或0.3μm；所述循環伏安法電鍍對氨基苯磺酸的體系為三電極體系，其參比電極為飽和甘汞電極，對電極為鉑絲電極；所述循環伏安法電鍍對氨基苯磺酸的掃描范圍為-0.5～0.5V，掃描速度為100mV/s，掃描時間為30分鐘；所述對氨基苯磺酸溶液的摩爾濃度為5～50mmol/L，體積用量為1～4mL；所述五氯化磷溶液的摩爾濃度為10～100mmol/L，體積用量為1～4mL。

6.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述硫化氫的電化學檢測方法為：

將Au@Ag核殼納米粒子修飾玻碳電極浸入到磷酸緩沖液和硫化鈉溶液的混合溶液中反應30分鐘，經超純水沖洗干凈后用作工作電極，利用差分脈沖伏安法檢測Au@Ag核殼納米粒子的電化學氧化峰強度變化，以硫化氫濃度的對數值為橫坐標，所得的電化學氧化峰電流值為縱坐標，繪制標準曲線。

7.根據權利要求6所述的方法，其特征在于，所述磷酸緩沖液的濃度為0.1mol/L；所述磷酸鹽緩沖液的pH為7.4；所述混合溶液的體積為100μL，硫化鈉溶液的摩爾濃度為0.05～100000nmol/L；所述電化學檢測體系為三電極體系，其參比電極為Ag/AgCl電極，對電極為鉑絲電極；所述差分脈沖伏安法檢測的掃描范圍為-0.2～0.6V；掃描速度為4mV/s；所述差分脈沖伏安法使用磷酸鹽緩沖液的體積為2mL。

8.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述Hela細胞中內源性硫化氫的檢測方法是：

將100μL不同濃度的半胱氨酸分別加入到1mL含有Hela細胞的磷酸鉀緩沖液中，37℃條件下，溫育90min之后反復凍融裂解細胞，離心后取上清液定容到1mL冷藏備用，最后對定容后的細胞裂解液用差分脈沖伏安法進行檢測，根據標準曲線判斷檢測液中硫化氫的濃度。

9.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述含有Hela細胞的磷酸鉀緩沖液中Hela細胞的濃度為10⁶個/mL，磷酸緩沖液的濃度為50mmol/L；所述半胱氨酸的摩爾濃度為1～5mmol/L；所述反復凍融的溫度分別為-80℃、37℃，反復凍融的次數大于3次；用于差分脈沖伏安法檢測的細胞分解液的體積為100μL。