[發(fā)明專利]一種突變蛋白A（Protein A）親和層析介質(zhì)

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• 申請?zhí)枺?/td>: 201810513222.1
• 申請日: 2018-05-25
• 公開（公告）號(hào): CN108905990A
• 公開（公告）日: 2018-11-30
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 樊豐林
• 申請（專利權(quán)）人: 江蘇琺瑪賽譜生物科技有限公司
• 主分類號(hào): B01J20/26
• 分類號(hào): B01J20/26;B01J20/30;B01D15/38
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1.一種突變蛋白A（Protein A）（protein A）親和層析介質(zhì)，所述蛋白A（Protein A）親和層析介質(zhì)作為層析介質(zhì)應(yīng)用于抗體及Fc融合蛋白的分離純化中，所述蛋白A（Protein A）親和層析介質(zhì)以含基因工程修飾葡萄球菌蛋白A（Protein A）、瓊脂糖或葡聚糖凝膠的微球?yàn)榛|(zhì)，經(jīng)親水性樹枝狀大分子修飾、活化、偶聯(lián)蛋白A（Protein A）配基并封尾后得到，所述修飾蛋白A（Protein A）親和層析介質(zhì)為多孔微球介質(zhì)；所述親水性樹枝狀大分子修飾為在所述微球表面功能團(tuán)上接枝親水性樹枝狀大分子，所述親水性樹枝狀大分子包括但不限于超支化聚乙烯醇或聚甘油類大分子，所述活化為在所述微球表面接上功能團(tuán)，所述功能團(tuán)包括但不限于環(huán)氧、氨基、羧基類功能團(tuán)，所述偶聯(lián)突變蛋白A（Protein A）配基，為將蛋白A（Protein A）配基偶聯(lián)到所述微球活化后的表面功能團(tuán)上，所述封尾指利用含有羥基、巰基或氨基類的小分子與偶聯(lián)蛋白A（Protein A）配基后的微球表面的活性功能團(tuán)進(jìn)行反應(yīng)，消除未反應(yīng)的活性功能團(tuán)。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種突變蛋白A（Protein A）親和層析介質(zhì)，其特征在于，所述作為基質(zhì)瓊脂糖或葡聚糖凝膠的物微球，是粒徑均一多孔微球。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種突變蛋白A（Protein A）親和層析介質(zhì)，其特征在于，所述含基因工程突變的蛋白A（Protein A），此蛋白A（Protein A）氨基酸序列來源于金黃色葡萄球菌細(xì)胞壁蛋白，經(jīng)過基因突變對NaoH敏感的氨基酸，替換為耐受NaOH的氨基酸，使得此蛋白A（Protein A）親和層析介質(zhì)具有耐受NaoH的能力。

4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種蛋白A（Protein A）親和層析介質(zhì)，其特征在于，所述含乙烯基單體的微球的直徑范圍為5～150μm；所述含乙烯基單體的微球的孔徑范圍為50～100nm。

5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種蛋白A（Protein A）親和層析介質(zhì)，其突變蛋白A（ProteinA）的特征在于所述蛋白A（Protein A）親和層析介質(zhì)的配基突變蛋白A（Protein A），為基因工程修飾的，突變的位點(diǎn)為，N3A-N6A-N23T，突變體PS₁。

6.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種蛋白A（Protein A）親和層析介質(zhì)，其突變蛋白A（ProteinA）的特征在于，所述蛋白A（Protein A）親和層析介質(zhì)的配基突變蛋白A（Protein A），突變體以6 x PS₁的基因系列，構(gòu)建在大腸桿菌質(zhì)粒中，形成6 x PS₁突變體。

7.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種蛋白A（Protein A）親和層析介質(zhì)，其突變蛋白A（ProteinA）的特征在于，此6PS₁突變體配基，基因工程修飾的主要目的是：使其具對氫氧化鈉有更高的穩(wěn)定性。

8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種蛋白A（Protein A）親和層析介質(zhì)，其特征在于，此 6PS₁突變體配基與含乙烯基單體的高流速瓊脂糖微球偶聯(lián)后形成的親和層析介質(zhì)，提高了對氫氧化鈉的穩(wěn)定性,此蛋白A（Protein A）親和層析介質(zhì)耐受>1M NaOH 。

9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種蛋白A（Protein A）親和層析介質(zhì)，其特征在于，所述蛋白A（Protein A）親和層析介質(zhì)作為層析介質(zhì)應(yīng)用于抗體及Fc融合蛋白的分離純化時(shí)，以20mMPBS+150mM NaCl，pH7.0-pH8.0或50mM磷酸二氫鈉+100mMNaAc+150mM NaCl，pH7.0-pH8.0等緩沖液作為平衡相，以50mM Gly，pH3.0-pH4.0等緩沖液作為洗脫相。

10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種蛋白A（Protein A）親和層析介質(zhì)，其特征在于，所述蛋白A（Protein A）親和層析介質(zhì)作為層析介質(zhì)應(yīng)用于抗體及Fc融合蛋白的分離純化時(shí)，以此6PS₁突變體制備的瓊脂糖親和層析介質(zhì)具有更高的載量，一般對于抗體分子動(dòng)態(tài)載量>55g/L, 一般對于Fc融合蛋白分子動(dòng)態(tài)載量>45g/L。