[發明專利]PEDV免疫檢測層析試紙條及其制備方法和應用

在審

• 申請號: 201810510895.1
• 申請日: 2018-05-24
• 公開（公告）號: CN109061159A
• 公開（公告）日: 2018-12-21
• 發明（設計）人: 李軍;李漢銳;秦智鋒;孫潔;鄭曉聰;陳兵;劉建利;王津津;于力
• 申請（專利權）人: 深圳出入境檢驗檢疫局動植物檢驗檢疫技術中心;華南農業大學;清華大學深圳研究生院
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;G01N33/543
• 代理公司: 深圳鼎合誠知識產權代理有限公司 44281
• 代理人: 李小焦;彭家恩

本申請公開一種PEDV免疫檢測層析試紙條及其制備方法和應用。本申請的PEDV檢測免疫層析試紙條，包括搭接在支撐材料上的樣品墊和層析條；層析條上設置有檢測線和質控線，檢測線上固定有抗PEDV包被抗體，質控線上固定有羊抗鼠IgG抗體；樣品墊上噴涂有量子點標記抗PEDV抗體探針。本申請的PEDV免疫檢測層析試紙條，利用量子點標記抗PEDV抗體探針進行檢測，充分結合熒光量子點高靈敏的特性，以及抗原抗體特異性結合的特點，使得本申請的免疫層析檢測試紙條具有靈敏度高、特異性好，且檢測周期短的優勢，能夠滿足現場檢測的需求，適合用于豬流行性腹瀉病毒的普查監測。

技術領域

本發明涉及免疫層析檢測技術領域，具體涉及一種PEDV免疫檢測層析試紙條及其制備方法和應用。

背景技術

豬流行性腹瀉(PED)是由豬流行性腹瀉病毒(PEDV)引起的一種烈性豬傳染病，是目前全球傳播較廣的一種豬的傳染病，我國將其列為二類動物傳染病。豬流行性腹瀉在多個國家流行，并有愈演愈烈的趨勢，對PEDV的快速診斷是防控PED流行的前提和基礎，各國都加強了對流行性腹瀉的監控。但傳統的鑒別診斷方法，如病毒的抗原檢測、病毒的免疫電鏡觀察、病毒的分離與鑒定等，都需要十分煩瑣的病料前處理，不但工作量大、耗時長，而且操作復雜、診斷成本高。

因此，建立一個操作簡單、靈敏度高，特異性強、檢測時間短的能夠廣泛運用的診斷方法顯得尤為迫切。

發明內容

本申請的目的提供一種PEDV免疫檢測層析試紙條及其制備方法和應用。

為了實現上述目的，本申請采用了一下技術方案：

本申請的一方面公開了一種PEDV免疫檢測層析試紙條，其包括搭接在支撐材料上的樣品墊和層析條；層析條上設置有檢測線和質控線，檢測線上固定有抗PEDV包被抗體，質控線上固定有羊抗鼠IgG抗體；樣品墊上噴涂有量子點標記抗PEDV抗體探針。

需要說明的是，本申請的關鍵在于將抗PEDV包被抗體固定在檢測線上，并在樣品墊上噴涂有量子點標記抗PEDV抗體探針；使用時，待測樣品中如果含有PEDV，PEDV會與量子點標記抗PEDV抗體探針結合，然后層析到檢測線時會被抗PEDV包被抗體捕獲，從而在檢測線位置處聚集；而沒有結合PEDV的量子點標記抗PEDV抗體探針則會繼續層析到質控線位置處被羊抗鼠IgG抗體捕獲，在質控線上集聚；質控線和檢測線捕獲的量子點標記抗PEDV抗體探針，在365nm紫外光照射下會發出明亮的熒光條帶，通過檢測儀分析這些熒光信號即可實現PEDV的現場快速檢測?？梢岳斫?，本申請的關鍵在于抗PEDV包被抗體和量子點標記抗PEDV抗體探針的使用，實現了PEDV的免疫層析試紙條檢測，至于支撐材料、樣品墊、層析條等材料可以參考現有的免疫層析試紙，在此不做具體限定；甚至抗體包被方法、抗體與量子點的結合方法、噴涂方法等都可以參考現有技術，在此不做具體限定。

還需要說明的是，借助熒光量子點高靈敏的特性，結合抗原抗體特異性結合的特點，本申請的免疫層析抗原檢測試紙條具有靈敏度高，特異性好，且檢測周期短的優勢，適合用于豬流行性腹瀉病毒的分子生物學檢測和大規模的流行病學調查。

優選的，量子點標記抗PEDV抗體探針由PEDV單克隆抗體10A8a與羧基功能化量子點共價連接而成；抗PEDV包被抗體為PEDV單克隆抗體10F2a；其中，PEDV單克隆抗體10A8a、10F2a均為商品化購置針對PEDV的N蛋白單克隆抗體。

需要說明的是，原則上只要將兩個能夠匹配的PEDV抗體分別作為本申請的PEDV熒光量子點免疫層析試紙條的抗PEDV包被抗體和量子點標記抗PEDV抗體即可實現本申請的免疫層析試紙條；但是，本申請的一種實現方式中，優選的，量子點標記抗PEDV抗體探針由PEDV單克隆抗體10A8a與羧基功能化量子點共價連接而成；抗PEDV包被抗體為PEDV單克隆抗體10F2a。PEDV單克隆抗體10A8a和PEDV單克隆抗體10F2a均為購置的商業化單克隆抗體。