[發(fā)明專利]用于蛋白質(zhì)的混合式色譜純化的固相

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810509418.3
• 申請(qǐng)日: 2012-10-19
• 公開（公告）號(hào): CN108686634B
• 公開（公告）日: 2021-03-16
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: J·廖;L·奧列奇;陳虹;何學(xué)梅;R·弗羅斯特
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 生物輻射實(shí)驗(yàn)室股份有限公司
• 主分類號(hào): B01J20/286
• 分類號(hào): B01J20/286;B01D15/42;B01D15/38;B01J20/30
• 代理公司: 上海專利商標(biāo)事務(wù)所有限公司 31100
• 代理人: 余穎

通過一種混合式色譜系統(tǒng)純化蛋白質(zhì)，該系統(tǒng)由將具有陽(yáng)離子交換和疏水官能團(tuán)的配體與大孔支持物基質(zhì)連接而形成，配體與支持物基質(zhì)之間僅通過疏水基團(tuán)和支持物基質(zhì)之間鏈連接，所述鏈具有不超過3個(gè)原子的主鏈。

相關(guān)申請(qǐng)的交叉引用

本申請(qǐng)要求2011年10月19日提交的美國(guó)臨時(shí)專利申請(qǐng)?zhí)?1/549,146的優(yōu)先權(quán)，通過引用將該申請(qǐng)的內(nèi)容全文納入本文。

發(fā)明背景

1.技術(shù)領(lǐng)域

提供了用于純化或分離目的的從液體源提取免疫球蛋白或其他蛋白質(zhì)的技術(shù)，特別的重點(diǎn)在于色譜分離技術(shù)和材料。

2.現(xiàn)有技術(shù)說明

從主要是哺乳動(dòng)物體液或細(xì)胞培養(yǎng)收獲物的液體源提取免疫球蛋白和其他蛋白質(zhì)通常對(duì)于得到充分濃縮或純化形式的用于診斷和治療用途以及實(shí)驗(yàn)室研究的蛋白質(zhì)而言是重要的。然而，蛋白質(zhì)(尤其是免疫球蛋白)的純化通常受到以下因素的影響：低產(chǎn)率、使用昂貴的分離介質(zhì)、分離介質(zhì)浸入產(chǎn)物中，和在提取過程中使用的外源性材料的安全控制的影響。本發(fā)明設(shè)法解決這些問題中的至少一些。

發(fā)明內(nèi)容

已經(jīng)發(fā)現(xiàn)可以通過使用混合式色譜系統(tǒng)來實(shí)現(xiàn)對(duì)免疫球蛋白和其他蛋白質(zhì)的異常高效提取(即純化)，該混合式色譜系統(tǒng)結(jié)合陽(yáng)離子交換和疏水官能團(tuán)以及大孔支持基質(zhì)。將陽(yáng)離子交換和疏水性官能團(tuán)被納入配體中，使該配體結(jié)合至固體基質(zhì)，所述固體基質(zhì)具有0.5微米或更大的中值直徑的孔(基本上沒有直徑小于0.1微米的孔)，并且所述配體由該配體上的疏水基團(tuán)通過1-3個(gè)原子的鏈的連接偶聯(lián)至所述支持物基質(zhì)。使用常規(guī)結(jié)合和洗脫條件，在低pH下實(shí)現(xiàn)蛋白質(zhì)與基質(zhì)支持的配體的結(jié)合，而在較高pH下實(shí)現(xiàn)對(duì)已結(jié)合蛋白質(zhì)的洗脫。例如，利用液體源一次通過分離介質(zhì)來獲得高產(chǎn)率的高度純化的免疫球蛋白。分離介質(zhì)，即，基質(zhì)支持的配體與使配體與基質(zhì)連接的方法一樣本身是創(chuàng)新的。

在一些實(shí)施方式中，提供了用于從源溶液純化蛋白質(zhì)的方法，所述方法如下：

(a)使源溶液接觸混合式色譜介質(zhì)，所述混合式色譜介質(zhì)包含與固體支持物偶聯(lián)的配體，該配體包含疏水基團(tuán)以及羧基基團(tuán)或磺基基團(tuán)，其中疏水基團(tuán)通過含肽連接與羧基基團(tuán)或磺基基團(tuán)接合，并且其中固體支持物具有中值直徑為0.5微米或更大的孔并且基本沒有直徑為0.1微米或更小的孔，并且其中配體由疏水基團(tuán)通過1-3個(gè)原子的鏈偶聯(lián)至固體支持物，以通過配體來使源溶液中的蛋白質(zhì)結(jié)合至固體支持物；以及

(b)從固體支持物洗脫結(jié)合的蛋白質(zhì)。

在一些實(shí)施方式中，所述蛋白質(zhì)是抗體。

在一些實(shí)施方式中，在4.0-約6.0的pH下實(shí)施接觸步驟(步驟(a))并且在約6.1-約8.5的pH下實(shí)施洗脫步驟(步驟(b))。

本發(fā)明范圍內(nèi)的某些方法包括以下步驟：

(a)在pH 4.0-約6.0下，使含有抗體的源溶液接觸混合式色譜介質(zhì)，所述混合式色譜介質(zhì)包含與固體支持物偶聯(lián)的配體，配體包含疏水基團(tuán)以及羧基基團(tuán)或磺基基團(tuán)，并且固體支持物具有中值直徑為0.5微米或更大的孔而基本沒有直徑為0.1微米或更小的孔，配體由疏水基團(tuán)通過1-3個(gè)原子的鏈與固體支持物偶聯(lián)，以通過配體使源溶液中至少部分抗體與固體支持物結(jié)合；并且

(b)在約6.1-約8.5的pH下從固體支持物洗脫結(jié)合的抗體。

在一些實(shí)施方式中，所述疏水基團(tuán)是苯基基團(tuán)，并且在一些實(shí)施方式中，所述苯基基團(tuán)通過含肽連接與酸部分接合。

一些實(shí)施方式中，所述配體是苯甲酰氨基乙酸(benzamidoacetic acid)。在一些實(shí)施方式中，所述連接是位于苯甲酰氨基乙酸的苯環(huán)對(duì)位的烷基氨基基團(tuán)，從而所述配體和連接一起構(gòu)成對(duì)-氨基苯甲酰氨基乙酸基團(tuán)。

在一些實(shí)施方式中，所述固體支持物由中值粒徑為約25微米-約150微米的顆粒組成。